柱层析法从组分I中提取人纤维蛋白原的方法

摘要

本发明涉及柱层析法从组分I中提取人纤维蛋白原的方法，可有效解决人纤维蛋白原纯度高，稳定性好，收率高的问题，本发明由以下步骤实现：(1)FI沉淀的溶解及过滤；(2)S/D灭活；(3)第一次甘氨酸沉淀；(4)一次沉淀的溶解及过滤；(5)柱层析；(6)第二次甘氨酸沉淀；(7)二次沉淀的溶解及过滤；(8)配制；(9)分装及冻干；(10)干热灭活；该法采用甘氨酸作为沉淀剂，使最终制品中夹带有0.5％左右的甘氨酸，甘氨酸与盐酸精氨酸联合作为制品稳定剂，能够增强制品冻干后的稳定性，提高制品的质量、纯度和最终产品的收率，是制备人纤维蛋白原的创新。

主权项

一种柱层析法从组分I中提取人纤维蛋白原的方法，其特征在于，是由以下步骤实现：(1)组分I沉淀的溶解及过滤：沉淀用5～8倍体积的第一溶解液，20‑26℃搅拌溶解1小时，溶解后的制品澄清过滤，计量制品体积；所述的第一溶解液为：每1000ml注射用水溶液中含有：10～14g柠檬酸三钠，9g NaCl，8～12g蔗糖，2～4gTris，3～5g赖氨酸盐酸盐，用HCl调整pH值：6.90‑7.10；(2)S／D灭活：将制品温度控制在24～26℃，按每升滤液加100ml的比例，在搅拌状态下缓慢加入质量浓度的11％S／D灭活剂，保持制品温度24～26℃6小时；所述的11％S／D灭活剂为，1000ml注射用水溶液中含有：110g吐温‑80，33g磷酸三丁酯；(3)第一次甘氨酸沉淀：计量步骤(2)中灭活液体积，按1.5～2.2mol／L浓度加入甘氨酸粉末，充分溶解后冷却至2～8℃，以4200rpm的速度进行连续离心分离40分钟，设定温度0℃，收集沉淀；(4)一次沉淀的溶解及过滤：沉淀用5～7倍体积的第二溶解液，在20‑26℃搅拌溶解1小时，溶解后过滤，收集滤液；所述的第二溶解液为，1000ml注射用水溶液中含有：5～10g柠檬酸三钠，加HCl调整pH值：6.90‑7.10；(5)柱层析：DEAE‑650M凝胶先用枸橼酸缓冲液平衡，再将步骤(4)中的滤液上柱进行层析，收集流出液，层析结束后用3倍柱床体积的枸橼酸缓冲液洗涤凝胶，并入流出液中；(6)第二次甘氨酸沉淀：层析流出液按1.5～2.2mol／L浓度加入甘氨酸粉末，充分溶解后冷却至2～8℃，用离心机以4200rpm的速度进行连续离心分离40分钟，‑5℃收集沉淀；(7)二次沉淀的溶解及过滤：沉淀用3～5倍体积的第三溶解液，室温溶解1小时，溶解后，过滤；所述的第三溶解液为，1000ml注射用水溶液中含有：14～16.5g的枸橼酸钠，30～55g盐酸精氨酸，7～9g的氯化钠，用HCl或NaOH调整溶液pH6.9～7.1；(8)配制：检测过滤后制品蛋白质含量，根据蛋白质含量用第三溶解液进行配制，使最终制品中蛋白含量为25g／L；(9)分装及冻干：配制后制品除菌分装于50ml玻璃瓶中，25ml／瓶，分装后冻干；(10)干热灭活：步骤(9)中冻干后制品置于水浴中，保持水浴温度100℃，30分钟；所述的步骤(1)中所称的澄清过滤采用滤板澄清过滤，其滤板孔径为0.7μm～1.0μm。