基于一维长柱液相色谱串联质谱的蛋白质组分离鉴定方法

摘要

本发明属生物技术领域，涉及基于一维长柱液相色谱串联质谱的蛋白质组分离鉴定方法。该鉴定方法使用50cm的反相色谱柱，采用一维长梯度对蛋白质组学样品进行分离，经电喷雾电离，串联质谱进行一维蛋白质组分离鉴定，使用结果表明，本鉴定方法的实验操作简单、不需预分馏分，一次实验可达到传统二维分离质谱鉴定的效果；特别是对于少量样品的处理，一次实验仅需几微克样品就可完成一次蛋白质组学的数据分析，所需样品量少,对复杂生物蛋白质组的仪器分析效率达到7小时内实现对4000个以上蛋白质的分析鉴定，实现蛋白质的快速高效鉴定。

主权项

基于一维长柱液相色谱串联质谱的蛋白质组分离鉴定方法，其特征在于，包括步骤：(1)裂解液从细胞或组织中提取全部蛋白质混合物；(2)蛋白质经沉淀，重悬，进行还原烷基化；(3)采用蛋白酶将待分离鉴定的蛋白质混合物酶解成肽段混合物；(4)将酶解获得的肽段混合物进行一维液相色谱串联质谱鉴定；所述的液相色谱串联质谱中，色谱柱长度为色谱分离柱长度大于40cm，色谱梯度为三步长梯度洗脱。