一种人白细胞介素-37b的生产方法

摘要

本发明公开了一种人白细胞介素-37b的生产方法，采用基因工程方法生产，该基因工程方法包括以下步骤：1）合成PCR引物；2）PCR扩增获得IL-37b基因片段；3）构建重组载体pET-44-IL-37b；4）将重组载体pET-44-IL-37b转化细菌，构建重组IL-37b工程菌；5）培养构建的重组IL-37b工程菌，诱导其表达生产IL-37b。本发明人白细胞介素-37b的生产方法，采用含有特定限制性酶切位点的引物，准确、快速获得IL-37b基因的成熟肽cDNA片段，并成功克隆到IPTG诱导的pET载体上；使用大肠杆菌偏爱的终止密码子提高表达效率，表达量高；用HisTag蛋白亲和层析柱一步纯化即可获得纯度较高的产品。IL-37b的制备，对于研究其性质及功能有重要意义，为临床炎症性疾病的治疗提供了一个新靶点。

主权项

一种人白细胞介素‑37b的生产方法，其特征在于采用基因工程方法生产，所述的基因工程方法包括以下步骤：1）合成PCR引物，并在合成的引物中导入Nde I和Xho I酶切位点，上游引物为5‑GGAATTCCATATGGAACCCCAGTGCTGCTTA‑3，下游引物为5‑CCGCTCGAGATCGCTGACCTCACTG‑3；2）PCR扩增：从包皮中提取总RNA，逆转录合成cDNA，通过RT‑PCR基因扩增，获得IL‑37b基因片段；3）构建重组载体：将上述PCR扩增得到的IL‑37b基因片段与pET‑44载体连接，构建重组载体pET‑44‑IL‑37b；4）转化：将重组载体pET‑44‑IL‑37b转化细菌，构建重组IL‑37b工程菌；5）培养：培养构建的重组IL‑37b工程菌，诱导其表达生产IL‑37b。