一种重组酿酒酵母发酵菊芋生产乙醇的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种重组酿酒酵母发酵菊芋生产乙醇的方法，该方法是以菊芋粉为培养基，用重组酿酒酵母厌氧发酵生产乙醇；在60h内，乙醇发酵浓度即可达到9％以上。采用本发明所述原料和发酵方法，可以替代我国现有乙醇工业生产中所采用的玉米粉、小麦粉等粮食类原料，为非粮燃料乙醇生产奠定了基础。

主权项

一种重组酿酒酵母发酵菊芋生产乙醇的方法，其特征在于所述方法包括：a提供菊芋原料：鲜菊芋原料清洗、捣碎或切片、晾干或烘干后研磨成粗粉；b菊芋粗粉加水配成的发酵培养基，将OD600数值为10的重组酿酒酵母按10%体积比接种于发酵培养基中，30‑33℃进行厌氧发酵24h后，添加干菊芋粉，搅拌均匀使添加后菊芋粉浓度达到280g/L，使得发酵液中总糖浓度达到180g/L，继续厌氧发酵24‑36h，产生乙醇；所述发酵培养基中菊芋粗粉与水的质量比为1﹕4；所述重组酿酒酵母包含p‑inu基因；所述包含p‑inu基因的重组酿酒酵母的构建包括：①以马克斯克鲁维酵母基因组为模板，PCR扩增得到p‑inu基因，并连接到克隆载体；②BamH I和BssH II酶分别切割载体质粒和含p‑inu基因的克隆载体；③将p‑inu基因插入载体质粒；④用所构建的重组质粒转入酿酒酵母中，得到重组酿酒酵母；所述步骤①中扩增引物序列如下：p‑inu forward primer：GCCggatccGAATTCTCAAACCGAA；p‑inu reverse primer：CGGgcgcgcAGATCAGATCAAACG；所述扩增和保存质粒用大肠杆菌E.coli DH5α；所述克隆载体为pMD19‑T所述载体质粒为HO‑2。