利用复合酶制备黑色素及其前体物质的方法

摘要

本发明提供一种利用复合酶制备黑色素及其前体物质的方法，其是利用从产黑色素的芽孢杆菌发酵液中提取的含有酪氨酸酶的复合酶，以酪氨酸和/或其衍生物为底物，通过酶促反应生成黑色素及其前体物质。本发明使用的复合酶来源稳定，酶活力高，生产效率高；通过酶促反应法生产系列黑色素前体物质简便易行，并进一步通过载体固定化的方法，可使酶反复使用，进一步降低了成本，提高了生产效率，制得的黑色素前体物质可作为有效的染发剂和抗氧化剂使用。

主权项

利用复合酶制备黑色素及其前体物质的方法，其特征在于，利用从产黑色素的芽孢杆菌发酵液中提取的含有酪氨酸酶的复合酶，以酪氨酸及其衍生物为底物，通过酶促反应生成黑色素及其前体物质；所述酪氨酸的衍生物为多巴或多巴胺；所述产黑色素的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）PMR02，保藏号CGMCC No.5640；对枯草芽孢杆菌PMR02进行发酵培养采用的培养基为：葡萄糖1～3g/L、(NH4)2SO41～3g/L、K2HPO40.5～2g/L、CaCO31～3g/L、MgSO40.5～1g/L，培养条件为：按2%～10%接种量接种种子培养液，34℃～42℃，摇床转速100～200r/min，发酵16～24h；所述种子培养液在630nm的OD值为0.8；从枯草芽孢杆菌发酵液中提取含有酪氨酸酶的复合酶所采用的方法为超滤或离心；还包括在进行酶促反应之前对复合酶进行固定化的步骤；并通过恒流泵循环送液的方法，控制反应速度，使反应停留在黑色素前体物质阶段；所述前体物质为多巴色素、5,6‑二羟基吲哚、5,6‑二羟基吲哚‑2‑羧酸。