一种吡咯喹啉醌依赖型葡萄糖脱氢酶的热稳定性突变体及其高通量筛选方法

摘要

本发明涉及一种定向改造可溶性吡咯喹啉醌依赖型葡萄糖脱氢酶(s-GDH)的分子结构，并采用高通量技术筛选热稳定性突变体的方法。其特征在于：通过易错PCR构建s-GDH的高容量突变文库，利用浸有有色底物的滤纸在菌落平板上进行原位筛选，并结合菌落直接转化法，获得s-GDH热稳定性提高的突变体。与野生型s-GDH相比，所述的s-GDH突变体的热稳定性获得了显著提高。得到高热稳定性的可溶性吡咯喹啉醌依赖型葡萄糖脱氢酶为进一步扩大葡萄糖脱氢酶的应用范围奠定了基础。

主权项

一种热稳定性提高的s‑GDH突变体，其特征在于野生型s‑GDH位于111，263，270，331，347，416位中的氨基酸中有一个被取代，其中这些位置对应于由醋酸钙不动杆菌Acinetobactercalcoaceticus L.M.D.79.41的s‑GDH野生型序列已知的氨基酸位置；野生型s‑GDH中位于111位的天冬氨酸被谷氨酸取代，位于263位的甘氨酸被半胱氨酸取代，位于270位的谷氨酰胺被组氨酸取代，位于331位的苏氨酸被甲硫氨酸取代，位于347位的丝氨酸被脯氨酸取代，位于416位的苏氨酸被异亮氨酸取代。