从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法

摘要

本发明公开了从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法。现有技术中从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法均是热处理法，热处理法回收率低，在回收过程中除白蛋白外的所有蛋白均变性，不能从中提取其他物质，使得提取成本增高。本发明通过组分Ⅳ沉淀溶解、纯化、组分Ⅴ沉淀的制备、组分V精制纯化、超滤、半成品配制、巴氏灭活等步骤有效的从组分Ⅳ沉淀中分离出组分Ⅴ进而配制成人血白蛋白成品，本发明用低温乙醇沉淀法能够去除杂蛋白，减少人血白蛋白的共沉，提高成品收率，减小蛋白质的变性，增加成品的稳定性。本发明在提取了人血白蛋白后，仍然可以提取其他组分，提高血浆的综合利用，是提取人血白蛋白方法上的创新。

主权项

从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于所述方法包括以下具体技术步骤：（1）组分Ⅳ沉淀溶解将组分Ⅳ沉淀放入2倍重量的1～2℃，8～10g/L的氯化钠中，搅拌溶解，保持溶液温度‑1～‑2℃,搅拌溶解5～6小时，即为组分Ⅳ沉淀溶解液；（2）纯化①将组分Ⅳ沉淀溶解液打入稀释液中稀释，稀释液的量为组分Ⅳ沉淀溶解液的3～4倍，稀释后将制品搅拌降温到‑2~‑3℃，按0.8~1.2L/分钟的速度缓慢加入1mol/L碳酸氢钠，调整制品pH值至6.1～6.4，‑2～‑3℃条件下搅拌6～8小时，得到组分Ⅳ溶解液备用；其中稀释液的配制是：含氯化钠0.15mol/L ,乙醇浓度27～30％（V/V），搅拌降温到‑2~‑3℃；②于组分Ⅳ溶解液中加入‑20℃以下95%的乙醇，使组分Ⅳ溶解液中乙醇浓度达到40～42％（V/V），乙醇加入速度保持到70～80L/h，加入过程中保持溶液温度‑2～‑3℃，乙醇加毕，用1mol/L的碳酸氢钠调整溶液pH值至6.6～6.7，降温使组分Ⅳ溶解液的温度至‑5.5～‑6℃，恒温搅拌6～8小时得到组分Ⅳ稀释液备用；③向组分Ⅳ稀释液中加入硅藻土，加入量为每100Kg组分Ⅳ沉淀用3～5Kg硅藻土，搅拌30‑40分钟后用压滤机压滤，压滤结束后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内液体，到出气泡为止，收集滤液，得到组分Ⅳ压滤液备用，沉淀弃丢；（3）组分Ⅴ沉淀的制备①计量组分Ⅳ压滤液体积，开启搅拌，降温，制品降温到‑6～‑7℃，缓慢加入2mol/L HAC，加入速度为50‑60ml/min，调整溶液pH至5.2～5.5，调整完pH后将制品降温至‑8～‑9℃并搅拌2小时，静放6～8小时；②开启搅拌，向组分Ⅳ压滤液中加入硅藻土，加入量以每100Kg 组分Ⅳ沉淀加1～2Kg硅藻土，搅拌30‑40分钟后开始压滤，滤液弃丢或收集后进行乙醇回收处理；收集组分Ⅴ沉淀备用；（4） 组分V精制纯化① 组分V沉淀用5倍体积的8%（V/V）乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后，测量溶液pH应在pH至4.50～4.70，制品最终温度控制为‑3.0℃±0.5℃，继续搅拌2~3小时压滤；    ② 压滤：压滤过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后停止，后用FV精制平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中得到纯化液备用；其中FV精制平衡液的配制：含乙醇12%（V/V），溶液pH值4.50~4. 70，降温至‑3.0℃±0.5℃；（5）超滤① 开启搅拌，用1M碳酸氢钠调整纯化液pH值至7.0～7.2；② 将纯化液首次超滤浓缩至蛋白浓度100～150g/L，用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透析，再用3倍的注射用水等体积透析得到白蛋白原液，将白蛋白原液最终超滤浓缩至蛋白质含量210g/L以上，用适量注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述蛋白液中即为人血白蛋白原液，取样进行原液检测；（6）半成品配制根据原液检定进行稀释配制：根据原液蛋白质含量进行配制，按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋白质120～130毫摩尔称取氯化钠，称取后以少量注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再将人血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度195～200g/L，调整pH值在6.8～7.0；（7）巴氏灭活：将制品进行60℃10小时灭活病毒，灭活后除菌分装。