鉴别核酸分子多态性的方法

摘要

本发明提供一种鉴别样品溶液中的核酸多态性的方法，所述溶液中的观察对象即核酸的浓度或数密度比常规光学分析技术更低。所述方法具有以下步骤：制备包含第一核酸探针和分析对象的核酸分子的样品溶液的步骤，所述第一核酸探针与具有多态性序列中的第一型碱基序列的单链核酸分子特异性杂交；使样品溶液中的核酸分子结合的步骤；通过扫描分子计数法计算样品溶液中的包含第一核酸探针的结合体的分子数的步骤；根据计算结果，鉴别分析对象的核酸分子的多态性的步骤；样品溶液还包含具有与所述多态性序列中的所述第一型以外的其他型碱基序列互补的碱基序列的寡核苷酸。

主权项

一种鉴别核酸分子多态性的方法，具有以下步骤：（a）样品溶液制备步骤：制备包含第一核酸探针和分析对象的核酸分子的样品溶液，所述第一核酸探针与具有多态性序列中的第一型碱基序列的单链核酸分子特异性杂交，（b）结合步骤：使所述步骤（a）中制备的样品溶液中的核酸分子结合，（c）计算步骤：在所述步骤（b）之后，计算所述步骤（a）中制备的样品溶液中的、包含第一核酸探针的结合体的分子数，（d）鉴别步骤：根据所述步骤（c）的结果，鉴别所述分析对象的核酸分子的多态性，（e）检测区域移动步骤：在所述步骤（c）中，使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统，在所述样品溶液内部移动所述光学系统的光检测区域的位置，（f）荧光检测步骤：在所述步骤（c）中，一边在所述样品溶液内部移动所述光学系统的光检测区域的位置，一边检测所述光检测区域中的由所述结合体发出的荧光，（g）结合体检测步骤：在所述步骤（c）中，根据所述检测到的光，逐个检测来自每个结合体的光信号，逐个检测结合体，（h）粒子计数步骤：在所述步骤（c）中，计数所述逐个检测的结合体的数量，并计数在所述光检测区域的位置移动中检测到的所述粒子的数量，所述步骤（a）中的样品溶液或在所述步骤（b）之后、所述步骤（c）之前的样品溶液，还包含具有与所述多态性序列中的所述第一型以外的其他型碱基序列互补的碱基序列的寡核苷酸。