木薯叶多酚氧化酶的制备方法

摘要

一种木薯叶多酚氧化酶的制备方法，将新鲜木薯叶洗净剪碎，按每克木薯叶配制pH为6的磷酸缓冲液4毫升，在45℃下加入质量为木薯叶总质量0.8%的纤维素酶作用45分钟，5℃下用组织捣碎仪捣碎至糊状后冷冻浸提5小时，抽滤后收集滤液；在5℃下冷冻离心，收集离心液得木薯叶多酚氧化酶粗酶液；粗酶液纯化先采用硫酸铵进行分级沉淀，收集的沉淀溶于5℃预冷的磷酸缓冲液，再采用葡聚糖凝胶sephadex G-75纯化，即得木薯叶多酚氧化酶纯化液，经真空冷冻干燥制成木薯叶多酚氧化酶冻干粉。本发明由于木薯叶廉价、易得且活性高，提供了高活性的木薯叶多酚氧化酶，具有实际应用价值。

主权项

一种木薯叶多酚氧化酶的制备方法，其特征是将新鲜木薯叶洗净剪碎，按每克木薯叶配制pH为6的磷酸缓冲液4毫升，在45℃下加入质量为木薯叶总质量0.8%的纤维素酶作用45分钟，5℃下用组织捣碎仪捣碎至糊状后冷冻浸提5小时，用纱布抽滤，弃去滤渣收集滤液；在5℃下以12000r/min冷冻离心25分钟，收集离心液得木薯叶多酚氧化酶粗酶液；木薯叶多酚氧化酶粗酶液纯化先采用硫酸铵进行分级沉淀，收集40%至80%饱和度的沉淀，沉淀溶于5℃的磷酸缓冲液，再采用葡聚糖凝胶sephadex G‑75纯化，即得木薯叶多酚氧化酶纯化液，经真空冷冻干燥制成冻干粉，即得木薯叶多酚氧化酶。