凝血酶适配体功能化电纺丝增强固相微萃取棒的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种凝血酶适配体功能化电纺丝增强固相微萃取棒的制备及应用。采用自由基水相沉淀聚合方法合成聚丙烯腈-马来酸聚合物，再直接以不锈钢丝为底材，用电纺丝技术制备表面积大、稳定性高、耐用性强的固相萃取棒，并采用碳二亚胺法将凝血酶适配体固定于萃取棒表面，制备凝血酶适配体功能化电纺丝增强固相微萃取棒；本发明制得的适配体功能化电纺丝增强固相微萃取棒能应用于人血清、人血浆和人血液等复杂样品中痕量凝血酶的分离分析。本发明的方法以不锈钢丝为底材，采用电纺丝技术制备并控制固相微萃取基体涂层的厚度，涂层均匀，疏松多孔，表面积大，所制备的萃取棒特异性强、稳定性高。

主权项

一种凝血酶适配体功能化电纺丝增强固相微萃取棒的制备方法，其特征在于具体步骤为：(1)采用自由基水相沉淀聚合方法合成聚丙烯腈‑马来酸聚合物: 在圆底烧瓶中加入10.6克丙烯腈和7.4克马来酸苷，再加入20毫升60 ℃的去离子水，60 ℃下恒温水浴并搅拌；通入氮气10分钟后，加入135毫克 K2S2O8和75毫克Na2SO3引发自由基水相沉淀聚合反应，并将反应的混合溶液迅速采用质量百分比浓度为40~60%的稀H2SO4调至pH值为 2.0，聚合反应3 小时，所得产物用去离子水和无水乙醇轮流洗涤4~6次即制得聚丙烯腈‑马来酸聚合物；(2)采用电纺丝技术将步骤(1)制得的聚丙烯腈‑马来酸聚合物固定在不锈钢丝表面制成固相微萃取棒: 将4.0克步骤(1)制得的聚丙烯腈‑马来酸聚合物加入到50毫升二甲基甲酰胺中，搅拌至完全溶解，制得聚合物溶液；采用电纺丝技术将聚合物溶液纺丝，接收端为不锈钢丝，其尺寸为长55毫米×直径1.5 毫米，纺丝电压为10 千伏，喷丝端与接收端距离为130 毫米，流速为0.30 毫升/小时，纺丝时间为50分钟；不锈钢丝上电喷丝长度为30 毫米，厚度为60‑65微米；(3)通过碳二亚胺方法将凝血酶适配体固定在步骤(2)制成的固相微萃取棒涂层上: a、在50 毫摩尔/升且 pH值为8.0的磷酸缓冲液中加入碳二亚胺即EDC和N‑羟基丁二酰亚胺即NHS，制得碳二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺的浓度均为100 毫摩尔/升的EDC/NHS混合溶液；b、将3根步骤(2)制成的固相微萃取棒放入到2.0 毫升步骤(3)第a 步制得的EDC/NHS混合溶液中活化2小时，再加入200 纳摩尔氨基化的凝血酶适配体即5′/5AmMC6/‑AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT‑3′，室温反应过夜，即制得凝血酶适配体功能化电纺丝增强固相微萃取棒； 所述化学试剂的纯度均为化学纯以上纯度。