青霉素酰化酶的凝胶团聚体状稳定生物催化剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种稳定实用、高效且作用稳定的生物催化剂及其固化方法。所述的固化方法的原理是沉淀部分纯化酶，同时使用如戊二醛等交联剂进行团聚，并包埋到如凝胶等天然聚合物和如聚乙烯醇等合成聚合物的混合物中，然后在温和的温度和pH中进行有效的凝胶化，获得一种稳定的生物催化剂。用这种方法固化的酶包括rE.coliREIII(pKA18)分泌的青霉素酰化酶，rE.coli BL21CCM7394(pKIPl)和rE.coli RE III(pKXIPl)表达的无色杆菌属分泌的新青霉素酰化酶。

主权项

一种制备稳定实用、高效且作用稳定的生物催化剂的方法，该方法使用固化同时结合沉淀、交联及包埋，其特征在于所述的固化方法包括以下步骤：(a)在1℃‑2℃的温度下，沉淀同时交联含有硫酸铵和戊二醛的青霉素酰化酶，获得交联的酶团聚体；(b)使交联了硫酸铵和戊二醛的酶在18至23摄氏度的高温下进行转化而自己产生固化交联的酶团聚体；(c)在低温下，将所述的团聚酶于10％w/w的聚乙烯醇和10％w/w的胰化凝胶混合溶液中混合2分钟，持续搅拌反应混合物直到形成凝固凝胶团聚体；(d)然后在5℃的低温下继续凝胶化至少12‑18个小时；(e)过150微米筛，得到凝胶酶，于是获得均匀分布的凝胶团聚体；(f)将戊二醛与凝胶团聚体在30℃，pH7.5‑7.6中进一步的再交联30分钟，以提高结构的稳定性；其中，所述硫酸铵的浓度为10‑50克/克蛋白质，所述用于交联的戊二醛的体积浓度为1.7‑2.0％，所述用于再交联的戊二醛的体积浓度为0.5‑0.75％；所述戊二醛的交联时间为5分钟。