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Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer DNA-Sequenz für eine Nukleinsäure-Bibliothek mit einer Vielzahl von Elementen. Die synthetisierte DNA-Sequenz umfasst jeweils mindestens drei Bereiche. Der erste und der dritte Bereich in jedem Element weist jeweils definierte Sequenzen (D1, D2) auf, die in allen Elementen der Nukleinsäure-Bibliothek jeweils identisch sind, In einem mittleren zweiten Bereich sind jeweils mindestens zwei benachbarte variable Codon-Tripletts angeordnet. Es werden folgende Verfahrensschritte durchgeführt: Zuerst hybridisiert man Oligonukleotide (O1-x) einer ersten Oligonukleotid-Bibliothek (O1b) mit einem ersten weitgehend komplementären Oligonukleotid (O2) zu einer ersten doppelsträngigen DNA-Bibliothek (O1xO2). Weiterhin hybridisiert man Oligonukleotide (O3-x) einer zweiten Oligonukleotid-Bibliothek (O3b) mit einem zweiten weitgehend komplementären Oligonukleotid (O4) zu einer zweiten doppelsträngigen DNA-Bibliothek (O3xO4). Anschließen werden die erste doppelsträngige DNA-Bibliothek (O1xO2) und die zweite doppelsträngige DNA-Bibliothek (O3xO4) zu einem doppelsträngigen DNA-Ligationsprodukten (LPx) ligiert. Dieses umfasst folgende Teilbereiche: definierter ersten Bereich (D1) der Nukleinsäure-Bibliothek, mindestens ein erstes variables Codon-Triplett (TV1), Spacer-Sequenz (S), mindestens ein zweites variables Codon-Triplett (TV2) und definierter zweiter Bereich (D2) der Nukleinsäure-Bibliothek. Nach Entfernen der Spacer-Sequenz (S) erhält man eine Bibliothek von doppelsträngigem DNA-Produkt (Px), das folgende Teilbereiche umfasst: definierter ersten Bereich (D1) der Nukleinsäure-Bibliothek, mindestens ein erstes variables Codon-Triplet (TV1), mindestens ein zweites variables Codon-Triplet (TV2) und definierter zweiter Bereich (D2) der Nukleinsäure-Bibliothek. |
