一种同时检测两种环境雌激素的传感器的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种同时检测两种环境雌激素的传感器的制备方法及应用，属于纳米功能材料、环境检测、生物免疫技术和电化学分析领域。将Pt杂化的SBA-15纳米复合材料标记二抗，通过测定材料对底液中过氧化氢的催化性能，制备一种双通道印刷电极电化学免疫传感器，实现对两种环境雌激素己烯雌酚和雌二醇的同时检测。本发明制备简单、加工方便、便于携带；该检测方法简单、快速、灵敏度高、特异性好。

主权项

1.一种同时检测两种环境雌激素的传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）氨基化SBA-15的合成将1g三嵌段共聚物EO20PO70EO20（P123）溶解在30mL、1.5~2molL^-1的HCl溶液中，加入2.215g正硅酸乙酯（TEOS），混合物在34℃下搅拌4~5h，转移到高压釜在100℃条件下加热20~22h，冷却后过滤，将获得的白色粉末在空气中干燥，然后在560℃条件下煅烧3~4h除去模板，合成制得SBA-15；将所合成的SBA-15，加10~15mL无水乙醇，置于100mL三口烧瓶中，油浴，加热到70℃后，迅速加入50μL3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃恒温回流3h，离心，用无水乙醇洗涤沉淀3次，室温下真空干燥9~11h，得到氨基功能化的SBA-15；（2）Pt杂化的SBA-15的合成将氨基功能化的SBA-15与HPtCl₄以质量比1:0.5~1混合并用水稀释成溶液，将混合物在室温下搅拌18~24h，离心后用水重新稀释，用稀HCl调节溶液的pH<2，搅拌20~25min，得到混合液；将40~50mmolL^-1的NaBH₄溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl₄全部还原成金属Pt，将混合液离心、真空干燥，制得Pt杂化的SBA-15（Pt@SBA-15）；（3）石墨烯（GS）溶液制备将2.0mgGS溶解于1mL高纯水中，超声0.5~2h，制成浓度为2mgmL^-1GS溶液；（4）Pt@SBA-15/二抗溶液的制备取1~2mgPt@SBA-15分散在1mL的pH7.4的PBS缓冲溶液中，加入0.5~1.5mL、质量分数为2.5%的戊二醛溶液，搅拌2~4h；加入1~2mL两种环境雌激素二抗（Ab₂）中的一种，将上述混合物在室温下搅拌10~12h，离心，制得两种Pt@SBA-15/Ab₂溶液，置于4C下储存，备用；（5）双通道免疫传感器的构建1）取一片双通道丝网印刷电极，超纯水冲洗；分别取4~6μL、2mgmL^-1GS溶液，滴涂到双通道丝网印刷电极的2个工作电极表面上，室温晾干；2）在1）中得到的2个工作电极的表面上分别滴加6~8μL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺（EDC/NHS）混合溶液，保持湿润、孵化1~2h，超纯水清洗，晾干；所述EDC和NHS的浓度分别为1~4mg/mL和1mg/mL；3）分别取4~8μL两种环境雌激素一抗（Ab₁），分别滴涂于2）得到的对应的两个工作电极表面上，4^oC条件下晾干；4）分别取4~6μL、质量分数为0.5~1%的BSA溶液，滴涂于3）得到两个工作电极表面上，保持电极湿润3~4h，4^oC下晾干，超纯水清洗、晾干，制得一种同时检测两种环境雌激素的传感器。