一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法

摘要

本发明提供一种梅花叶片愈伤组织诱导方法，其为以真梅系梅花品种胚培养获得的实生苗的幼嫩叶片为外植体，近轴面朝上接入愈伤组织诱导培养基，暗培养2周以上，所述的愈伤组织诱导培养基为MS+蔗糖20～40g/L+2，4-D 0.25～2.00mg/L，pH＝5.8～6.0的固体培养基。本发明中建立了梅花叶片愈伤组织高效诱导的培养体系，该体系的建立，能够高效的诱导愈伤组织，使叶片愈伤组织的诱导率可达90％以上，而且愈伤组织的增殖量大。

主权项

一种梅花叶片愈伤组织诱导方法，其为以真梅系梅花品种胚培养获得的实生苗的幼嫩叶片为外植体，近轴面朝上接入愈伤组织诱导培养基，暗培养2周以上，所述的愈伤组织诱导培养基为MS+蔗糖20~40g/L+2,4‑D0.25~2.00mg/L，pH=5.8~6.0的固体培养基；所述胚培养包括如下步骤：1）取开花后50~70天未成熟的梅花果实，用0.5~1.5%的高锰酸钾溶液清洗外果皮并浸泡1~2h，之后流水冲洗1~2h；2）砸碎果实，取出种子，并用流水清洗去掉种皮；3）将步骤2）去掉种皮的种子用70%的乙醇浸泡20~40s，1%升汞浸泡8~15min，无菌水冲洗至少3次后备用；4）将步骤3）表面灭菌后的种子保留部分子叶，接种于MS+0.5~1.5mg/L6‑BA+0.1~0.3mg/L IBA+蔗糖20~40g/L，pH=5.8~6.0的固体实生苗诱导培养基中，暗培养1~3周后，进行光照培养，光照强度为2000~3000Lx，光照时间为14h/d。