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一种猪羊水干细胞系的建立方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1）羊水干细胞的原代分离培养；具体实现方式是：1.1）收集怀孕母猪的羊水，连同子宫带回，无菌打开子宫，分出由胎衣完整包裹的羊水备用，测量胎儿的大小，详细记录，然后抽取羊水；1.2）用100目滤纱过滤，以除去较大的组织碎片，然后2000r/min，离心10min，弃上清，收集细胞；1.3）将步骤1.2）中所收集的细胞加入含有5%血清+5%双抗的PBS溶液中，混匀，置38℃，5% CO2培养箱中处理10分钟，然后离心，收集细胞，重复3次；1.4）将分离出的猪羊水细胞加入原代羊水细胞培养液接种于不同的培养皿中，置于38℃、5%CO2培养箱中培养；所述原代羊水细胞培养液是α‑MEM+15% FBS+10ng BFGF+2mmol/L谷胺酰胺+100u/ml青霉素+100u/ml链霉素的培养液；2）将分离培养的原代羊水干细胞进行机械分离纯化；3）将分离纯化后的羊水干细胞进行培养和检测，建立猪羊水干细胞系，其具体实现方式是：3.1）待分离纯化后的羊水干细胞长至融合时，弃去培养液，用PBS洗2‑3遍，然后用0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA细胞消化液在38℃条件下消化3‑4分钟；3.2）等量细胞培养液中止消化；3.3）将经过消化的羊水干细胞在1000r/min 离心5‑10分钟；3.4）弃上清，计数，调整细胞浓度为1.0×105个／ml将细胞悬液接到培养皿上，加细胞培养液； 3.5）连续培养4‑8代后，上皮样细胞逐渐减少消失，90%以上表现为成纤维样细胞,细胞大量扩增，即建成羊水干细胞系。 |
