一种完全培养基及人羊膜间充质干细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种完全培养基及人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的培养方法。完全培养基是按体积比向低糖-Dulbecco极限必须培养基溶液中加入3％-10％的人自体脐带血血清配制而成；培养方法包括：(1)分离；(2)原代培养；(3)传代培养。本发明采用前述完全培养基用于hAMSCs培养的优点为：回避了使用胎牛血清的风险，且无需添加L-谷氨酰胺、非必需氨基酸、2-巯基乙醇和丙酮酸等，仍可保持hAMSCs较好的增殖特性和表型特征及一些干细胞多向分化潜能标志基因和蛋白表达；传代培养中hAMSCs贴壁的牢固程度明显低于FBS培养条件，消化时间明显缩短，减少了胰酶消化对细胞的损伤和细胞数量的损失。

主权项

一种完全培养基，其特征在于：它是按体积比向低糖‑Dulbecco极限必须培养基溶液中加入3%‑10%的人自体脐带血血清配制而成；所述低糖‑Dulbecco极限必须培养基溶液这样制备：取低糖‑Dulbecco极限必须培养基10g溶于1000ml超纯水中，调pH值至7.2‑7.4，过滤除菌，分装，4℃保存，即可；所述人自体脐带血血清这样制备：无菌条件下抽取脐带血50‑70ml，注入无菌玻璃瓶中，静置于37℃培养箱2h，待血凝块完全析出后，无菌条件下，超净台中吸取析出的血清，移入新的无菌离心管内，4℃、1000g离心20min，收集上清15‑20ml，56℃水浴灭活30min，0.2μm滤器除菌后,血清分装于5ml小瓶，－20℃保存、备用；同时进行培养，检菌，无细菌生长即可。