一种快速分离纯化基因组DNA的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速分离纯化基因组DNA的方法及试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁性微粒、清洗液和洗脱液，本发明提供了一种用磁性微粒法全过程不需加热可快速分离纯化得到高纯度基因组DNA的方法及试剂盒；提取时间短、操作简单，20分钟内可完成一次操作；灵敏度高，小到2ul大到1ml的样本都可处理。纯化得到的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等等下游实验。

主权项

一种快速分离纯化基因组DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁性微粒、清洗液和洗脱液，其特征在于所述试剂盒由如下试剂组成：a  所述裂解液包括裂解液Ⅰ和裂解液Ⅱ；所述裂解液Ⅰ包括10‑70mM三羟甲基氨基甲烷、0.1‑50mM螯合离子、50‑500mM钠盐、0.2‑5%阴性离子去污剂、0.5‑10%中性去污剂和0.1‑0.5mg/ml的蛋白酶K，所述裂解液Ⅰ的pH值7‑9；所述裂解液Ⅱ包括30‑100mM三羟甲基氨基甲烷、0.2‑5%阴性离子去污剂、2‑6M胍盐和10‑40%的醇，所述裂解液Ⅱ的pH值6‑7.5；b  所述磁性微粒包括磁性微粒的悬浮液和磁性微粒，所述磁性微粒悬浮液包括5‑50mM三羟甲基氨基甲烷及50‑100%乙醇或异丙醇两种中的一种；所述磁性微粒为纳米级或微米级硅包被的磁性微球，每毫升的磁性悬浮液中的磁性微粒为20‑100mg；c  所述清洗液包括清洗液Ⅰ和清洗液Ⅱ；所述清洗液Ⅰ包括0‑5M胍盐、0‑50%的醇、0‑10mM三羟甲基氨基甲烷、0‑200mM醋酸钾和0‑5%中性去污剂，所述清洗液Ⅰ的pH值6‑7；所述清洗液Ⅱ为10‑80%的醇；d  所述洗脱液为10‑20mM三羟甲基氨基甲烷，所述洗脱液的pH值7.5‑9。