一种快速提取高纯度质粒DNA的方法

摘要

本发明涉及一种快速提取高纯度质粒DNA的方法，属于核酸纯化技术领域。首先向大肠杆菌沉淀物中加入悬浮液，涡旋振荡至沉淀完全溶解，然后加入碱裂解液，混匀后加入快速沉淀缓冲液，再混匀后进行离心分离1分钟，取上清转入硅膜吸附柱中，进行吸附离心，加入漂洗液进行脱盐离心，加入无核糖核酸酶的水洗脱离心，得到质粒核糖核酸溶液。本发明方法具有高效、快速、简洁的特点，纯化的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

主权项

1.一种快速提取高纯度质粒DNA的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤：（1）对1～3毫升培养12～16小时的大肠杆菌菌液进行离心分离，离心分离的转速为13000转/分钟，离心分离的时间为1分钟，取出离心分离的沉淀物；（2）向步骤（1）的沉淀物中加入75微升悬浮液，悬浮液的成分为：50毫摩尔葡萄糖、25毫摩尔三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和10毫摩尔乙二胺四乙酸，涡旋振荡至沉淀完全溶解，得到第一溶液；（3）向上述第一溶液中加入75微升碱裂解液，碱裂解液的成分为：200毫摩尔氢氧化钠和重量体积比为1%的十二烷基硫酸钠，上下翻转6～8次，使步骤（2）中所得到的菌体充分裂解，得到第二溶液；（4）向第二溶液中加入210微升快速沉淀缓冲液，上下翻转6～8次，充分混匀，对混合物进行离心分离，离心分离的转速为13000转/分钟，离心分离时间为1分钟，其中的快速沉淀缓冲液中各组分的质量为：将上述各组分称重后混合，加去离子水，得到混合液，并使混合液体积为100毫升；（5）将步骤（4）中离心分离得到的上清液转入硅膜吸附柱中，进行吸附离心，吸附离心的转速为13000转/分钟，吸附离心时间为30秒，倒去废液；（6）向步骤（5）的硅膜吸附柱中加入300微升漂洗液，漂洗液的成分为10毫摩尔三羟甲基氨基甲烷盐酸盐以及体积百分比为75%的无水乙醇，漂洗液的pH值为7.5，进行脱盐离心，脱盐离心的转速为13000转/分钟，脱盐离心时间为30秒，倒去废液；（7）在步骤（6）的硅膜吸附柱中加入50～100微升洗脱缓冲液，洗脱缓冲液为10毫摩尔三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，洗脱缓冲液的pH值为8，进行洗脱离心，洗脱离心的转速为13000转/分钟，洗脱离心时间为30秒，得到高纯度质粒DNA。