一种NPTⅡ基因检测用引物组、相应的试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开一种NPTII基因检测用引物组，所述引物组由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP组成，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～4或SEQ ID NO：5～9所示。本发明所述引物组根据是否扩增就能判断靶标物质存在与否，具有高度特异性。本发明还公开一种检测NPTII基因的试剂盒，所述试剂盒包括以NPTII基因为靶基因、基于环介导等温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。所述试剂盒可以快速检测NPTII基因，只需一个恒定温度就能扩增，不需要特殊试剂或设备，检测成本低，而且灵敏度和特异性高。同时，本发明还公开了所述试剂盒的使用方法。

主权项

一种检测NPTⅡ基因的试剂盒，其特征在于，所述检测NPTⅡ基因的试剂盒包括以NPTⅡ基因为靶基因、基于环介导等温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3；所述的两对引物的核苷酸序列分别为：外引物F3（1）：GCTGGATCGTTTCGCATGA外引物B3（1）：GCAGTTCATTCAGGGCACC内引物FIP（1）：GCCCAGTCATAGCCGAATAGCCTTTTGAACAAGATGGATTGCACGC内引物BIP（1）：GACAATCGGCTGCTCTGATGCCTTTTGGACAGGTCGGTCTTGACA或外引物F3（2）：CTGTTCGCCAGGCTCAAG外引物B3（2）：CGCCAAGCTCTTCAGCAATA内引物FIP（2）：GAAAAGCGGCCATTTTCCACCATTTTGCGAGGATCTCGTCGTGA内引物BIP（2）：GGATTCATCGACTGTGGCCGGTTTTGGTAGCCAACGCTATGTCC；所述试剂盒还包括BstDNA聚合酶、反应液、稳定液、显色液和阳性对照液；所述的反应液为：每1L反应液含有1.6～2mmoldNTP、20～25mmolTris‑Cl、10～12.5mmol氯化钾、10～12.5mmol硫酸铵、8～10mmol硫酸镁、1～1.25mlTritonX‑100、0.8～1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各1.6～2mol和外引物F3/B3各0.2～0.25mol；所述的稳定液为石蜡油；所述的显色液为SYBRGreenI或EvaGreen；所述的阳性对照为NPTⅡ基因DNA片段。