一种固定化脂肪酶制备方法

摘要

一种固定化脂肪酶的制备方法，其特征是以以天然多年生宿根性草本植物特别是天然纤维--苎麻和猪胰脂肪酶为原料，以苎麻为脂肪酶的载体，对苎麻进行活化、猪胰脂肪酶液制备，然后采用共价交联的方法进行脂肪酶的固定化。苎麻来源广泛,价格低廉。固定化脂肪酶催化制备生物柴油，可以反复使用,可大大提高固定化脂肪酶的使用稳定性和催化效果，降低生产生物柴油的生产成本。

主权项

一种固定化脂肪酶的制备方法，其特征是以天然多年生宿根性草本植物苎麻和猪胰脂肪酶为原料，包括将苎麻的活化、猪胰脂肪酶液制备和共价交联如下三个步骤：（1）苎麻的活化：剪取若干苎麻，用0. 5—1.0mo1/ L KOH煮沸0.5—1.0小时除去苎麻表面的杂质，然后用0.1—0.6 mol/L浓度的NaI04溶液氧化，5—12小时后取出用去离子水洗净，加甘油于苎麻表面静置30—60 min，以除去未反应的NaIO4，用去离子水洗净待用；  （2）酶液制备：将一定量猪胰脂肪酶干粉溶于50mL的磷酸缓冲液：0. 025—0.500mo1/ L，pH 7.5中，4℃低温下搅拌均匀，在10000r/min转速下离心10 min，然后取上清液贮于冰箱内备用；（3）交联：将步骤(1)活化的苎麻置于锥形瓶中与步骤(2)得到的酶液在4℃下进行交联，每交联30—60分钟，震荡10—30分钟，反应2—6个小时；交联完毕后，用去离子水在室温下反复洗涤固定化酶5—10次以上，以确保苎麻表面未交联上的游离酶被洗下，为提高醛基的交联度，采取重复步骤(3)的方法进行反复交联；每次取出苎麻后，用滤纸吸干苎麻表面水分，再放入酶液中进行交联。