主权项 |
以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法,其特征在于包括以下步骤:1)、制备单一碳源介质:溶解5 g (NH4)2SO4, 3 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4.7H2O, 15 mg EDTA, 4.5 mg ZnSO4.7H2O, 4.5 mg CaCl2.2H2O, 3 mg FeSO4.7H2O, 1 mg MnCl2.4H2O, 1 mg H3BO3, 0.4 mg Na2MoO4.2H2O, 0.3 mg CuSO4. 5H2O, 0.3 mg CoCl2.6H2O 和 0.1 mg KI至900ml蒸馏水中,用0.1mol/L NaOH溶液调pH至6.2~6.4,再用蒸馏水定容至1000ml;得液态单一碳源介质;2)、制备液体抗性培养基和固体抗性培养基:在液态单一碳源介质中加入青霉素直至青霉素的浓度为0.8~1.2g/L,过0.22μm滤膜;得液体抗性培养基;在500mL的液态单一碳源介质中加入7.5克琼脂后灭菌,冷却至40~50℃后,加入经过0.22μm滤膜的青霉素溶液直至所得的液态物中青霉素的浓度为0.8~1.2g/L;所得的液态物冷却后,得固体抗性培养基;3)、制备土壤稀释液:称1g土壤放入盛有49 mL磷酸盐缓冲液的容器中,在摇床上振荡20~40min;得菌悬液;用液体抗性培养基将菌悬液稀释至菌悬液的体积浓度为0.1%的土壤稀释液;以上操作在超菌台中完成;4)、倒置培养:在超菌台上,将土壤稀释液涂布在固体抗性培养基上;然后室温静止5~10 min;接着,将固体抗性培养基倒置于恒温培养箱29~31℃下培养,直至固体抗性培养基表面长出菌落,再通过平板划线得到纯培养物,所述纯培养物为土壤细菌。 |