重金属Cu²⁺完全抗原及其制备方法

摘要

本发明公开了一种重金属Cu2+完全抗原及其制备方法，将Cu2+与双功能螯合剂反应形成半抗原，Cu2+-螯合剂半抗原再与载体蛋白反应形成Cu2+-螯合剂-载体蛋白完全抗原。本发明所得抗原具有较好的免疫原性，用此抗原免疫小鼠能制备Cu2+特异性单克隆抗体，可以进一步制各重金属Cu2+快速检测ELISA试剂盒及胶体金免疫层析试纸。

主权项

一种重金属Cu2+完全抗原的制备方法，包括以下步骤：取0.5~10 mg水溶性铜盐溶于50 μL超纯水，配制2.0~80 mg/mL的Cu2+溶液；取0.8~20 mg双功能螯合剂溶于50 μL二甲基亚砜，配制16~400 mg/mL的ITCBE或p‑SCN‑Bn‑DOTA溶液；取2.0~20.0 mg载体蛋白溶于1 mL HEPES缓冲溶液或碳酸盐缓冲液，配制2~20 mg/mL的载体蛋白溶液；将配制的50 μL 2.0~80 mg/mL的Cu2+溶液逐滴加入到50 μL ITCBE或p‑SCN‑Bn‑DOTA溶液中，于45~55 ℃、pH5.0~6.5振荡条件下反应15 min~3 h形成半抗原溶液；再将此半抗原溶液逐滴加入到1 mL 2~20 mg/mL的载体蛋白溶液中，于4℃或室温、pH9.0~10.5条件下振荡反应24 h；用超滤或透析的方法去除未反应的低分子物质，得Cu2+的完全抗原。2、根据权利要求1所述重金属Cu2+完全抗原的制备方法，其特征在于：水溶性铜盐包括Cu(NO3)2、CuCl2、CuSO4、Cu(CH3COO)2或CuBr2任意一种。3、根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所用载体蛋白为钥孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白或卵清蛋白中的任意一种。 4、根据权利要求1所述重金属Cu2+完全抗原的制备方法，其特征在于：反应溶液中载体蛋白与ITCBE与Cu2+的质量比为：(20~32):(4~12):1；反应溶液中载体蛋白与p‑SCN‑Bn‑DOTA与Cu2+的质量比为：(8~12):(8~12):1。5、根据权利要求1所述重金属Cu2+完全抗原的制备方法，其特征在于：溶解载体蛋白的缓冲溶液为HEPES缓冲液，浓度为30~100 mM、pH为7.5~10.5；或碳酸盐缓冲液，pH为9.0~10.5。6、根据权利要求1所述重金属Cu2+完全抗原的制备方法，其特征在于：用于溶解、保存完全抗原的缓冲液为HEPES缓冲溶液，浓度为30~100 mM、pH为6.5~8.0；或柠檬酸铵缓冲液，浓度为10~30 mM、pH为6.5~8.0。7、根据权利要求1所述重金属Cu2+完全抗原的制备方法，其特征在于：采用超滤方法去除未反应的低分子物质时，选用截留分子量为10000~30000 dal的超滤离心管，6000 rpm~8000 rpm超滤6次，每次5~30 min。