一种基于连接酶反应的多特异位点DNA甲基化电化学检测方法

摘要

本发明公开了一种基于连接酶反应的多特异位点DNA甲基化电化学检测方法。该方法利用特异性免疫反应和标记抗体的酶在二氧化钛溶胶凝胶膜上表现的直接电化学响应，发展了新颖的无试剂免疫分析方法并制备了免疫传感器。利用二氧化钛溶胶凝胶气相沉积法固定抗原分子，并利用竞争免疫分析方法，通过直接测定反应到免疫传感器表面上标记抗体的酶的直接电化学响应信号的降低直接得到待测抗原的浓度。本方法无需进行繁琐的基因测序步骤，简化了分析体系，降低测定成本，具有很好的精确性，重复性和稳定性，可发展成为试剂盒并向市场推广。

主权项

一种多特异性位点DNA甲基化检测方法，包括如下步骤：（1）根据目标DNA序列上的每个特异性甲基化位点的侧翼序列设计一组核酸探针，每组核酸探针由一条分离探针和一条信号探针组成，分离探针用固相载体修饰，信号探针用量子点修饰，检测不同甲基化位点所使用的信号探针上修饰的量子点不同；（2）目标DNA样品用重亚硫酸盐处理，使未被甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶；（3）将分离探针和信号探针加入步骤（2）处理后的目标DNA溶液中进行杂交；（4）收集固相载体，清洗后加入DNA连接酶反应液进行连接反应，反应结束后进行解链反应，解链结束后，趁热将固相载体与反应液分离；（5）收集固相载体，清洗后利用溶出伏安法测定固相载体上连接的量子点的电化学信号；（6）根据电化学信号的归属和强度确定甲基化的位点和甲基化程度。