米格列醇中间体N-取代-1-脱氧野尻霉素衍生物的制备方法

摘要

本发明涉及一种米格列醇中间体的制备方法，尤其是涉及米格列醇关键中间体N-取代-1-脱氧野尻霉素衍生物的制备方法。多次套用氧化葡萄糖酸菌或者经细胞固定化技术处理的氧化葡萄糖酸菌，将转化底物进行转化制备米格列醇中间体N-取代-1-脱氧野尻霉素衍生物，控制转化温度为5℃～25℃，控制转化pH值为4.0～6.5，控制溶氧浓度在5％～80％(体积)。采用本发明可以降低生物转化生产成本，减少菌体批间差异，适合工业大规模生产，制得的菌珠壁机械强度高，长期液体环境培养，菌珠不发生溶解现象，并且使用寿命长，并具有优异的缓释性能。

主权项

一种制备米格列醇的中间体6‑(2‑羟乙基)‑氨基‑6‑脱氧‑α‑L‑山梨呋喃糖的方法，所述方法包括如下步骤：第一步：将转化底物用水溶解，使转化底物最终浓度为2重量％～10重量％，调节pH值为4.0～6.5，加入0.3重量％～0.6重量％MgSO4，加入菌液，转化底物与菌液中菌体的重量比为1∶1～3，控制转化温度为5℃～25℃，控制转化pH值为4.0～6.5，控制溶氧浓度在5体积％～80体积％；其中，所述转化底物为N‑(2‑羟乙基)‑葡糖胺；制备所述菌液的方法包括如下步骤：取培养至对数生长期或稳定期的氧化葡萄糖酸菌发酵液，用膜过滤去除发酵液，用水或0.3重量％～0.6重量％MgSO4溶液顶洗至总糖≤1.0重量％，氨基氮≤50mg/100ml，全程控制温度在10℃～30℃，压力在0～0.06MPa，pH值在5.0～7.0，得到菌液；第二步：将第一步中使用过一次的菌液用离心得到菌体，或用膜过滤去除转化液，用水或0.3重量％～0.6重量％MgSO4溶液项洗至总糖≤1.0重量％，氨基氮≤50mg/100ml，全程控制温度在5℃～30℃，压力在0.01Mpa～1MPa，pH值在5.0～7.0，得到菌液；第三步：将第二步得到的菌液重复所述第一步进行套用转化生产，每套用一次转化底物的加入量减少5％的重量。