一种Viili胞外多糖及其制备方法

摘要

本发明涉及一种Viili中胞外多糖及其制备方法，Viili胞外多糖的提取主要包括酶解、脱蛋白、乙醇沉淀等步骤；胞外多糖的分离纯化主要包括离子交换层析及凝胶过滤层析。本发明还公开了一种Viili中胞外多糖的组成，主要由鼠李糖、阿拉伯、木糖、苷露糖、葡萄糖、半乳糖组成，其摩尔比为：7.41∶15∶8.85∶1∶3.25∶1.25，该胞外多糖的单糖残基以吡喃环和呋喃环的形式存在。本发明Viili胞外多糖的制备方法及产品适于作为脂质体纳米材料及功能性食品中的功能因子，有利于某些特殊药物载体材料及新型功能食品开发。

主权项

1.一种Viili胞外多糖的制备方法，其特征在于，方法步骤如下：⑴发酵：纯牛乳灭菌，按1%～3%接种量接种Viili，将接种后的牛乳置于25-35C培养箱中，培养15～17h后取出，置于4C冰箱中4～8h，得到发酵乳；⑵等电点法除酪蛋白：用饱和NaOH溶液调发酵乳的pH至8.0，离心、取上清液，再用HCl调节上清液pH至4.6，再离心，再调上清液的pH至7.5；⑶酶解：在上述上清液中加入1/6总体积的胰酶液，胰酶液浓度为2-5g/L，水浴下酶解2-3h，3000r/min，离心15min，得到酶解液；⑷脱蛋白：以酶解液：氯仿：正丁醇=30：8：1进行蛋白质沉淀1-3h，离心，去除沉淀，得到的滤液中无游离蛋白；⑸乙醇沉淀：将步骤⑷所得滤液预冷，加入5～6倍体积的预冷无水乙醇，置于1-5C冰箱中沉淀40-55h，本步骤中多糖呈絮状沉淀析出，取沉淀；⑹透析：将经过步骤⑸得到的沉淀用截留14kDa分子量的透析袋在超纯水中透析25-30h，得沉淀物，在低于50C下进行真空干燥，得到Viili粗胞外多糖；⑺离子交换柱层析：将650.60mgViili粗胞外多糖用5mL蒸馏水溶解，上规格为2.5×50cm的DEAE纤维素柱，每管4mL分管收集，洗脱步骤如下：使用去离子水洗脱DEAE纤维素柱，得到一种胞外多糖组分，出现在第6～40管中，最高吸收峰OD值达到0.76，当洗脱超过2h之后没有明显的多糖成分被洗脱下来；⑻凝胶过滤层析：取步骤⑺获得的胞外多糖组分20mg用适量水溶解，用0.45μm的微孔滤膜过滤，上规格为1.6×60cm的SephendexG-50柱，用去离子水平衡48h，恒流泵控制流速9mL/h，用同一去离子水洗脱，每管3mL分部收集，硫酸-苯酚法检测，收集洗脱峰部洗脱液，经真空浓缩、冷冻干燥获得白色粉状的胞外多糖纯品，纯度大于99%。