一种IPTG诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达的方法

摘要

本发明公开了一种IPTG诱导猪圆环病毒2型（PCV2）重组Cap蛋白表达的方法，具体步骤如下：将pET28a-PCV2-ORF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的基因的质粒；再将构建的pET28a-ORF2-DH5a质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、液体培养，加入IPTG，在IPTG终浓度0.1-1.0mmlo/L条件下，10-37℃诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达1-8小时，得到Cap蛋白。其中，最佳诱导条件为IPTG终浓度0.6mmol/L，诱导温度30℃，诱导时间6h。本发明所述的最佳诱导条件能够极大程度提高重组Cap蛋白在大肠杆菌中的表达量，为开发PCV2基因工程苗和相关研究奠定了良好的基础。

主权项

一种IPTG诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达的方法，其特征在于，具体步骤如下：1）将pET28a‑PCV2‑ORF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液提取质粒；2）将提取的质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液，转接培养；3）在转接培养的菌液中加入IPTG，在IPTG终浓度0.1‑1.0mmlo/L条件下，10‑37℃诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达1‑8小时；4）取步骤3）不同条件制得的菌液，离心，弃上清液；5）在沉淀中加入loading buffer混匀，沸水浴后迅速冷却；6）离心，得到含有Cap蛋白的上清液。