发明名称 |
药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用 |
摘要 |
本发明公开一种药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用,所述药物筛选方法,用于筛选出对LOXL1基因表达有促进作用的物质,其中,所述药物筛选方法中,包括以下步骤:A、构建由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体;B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细胞,构建整合有PLOXL1-ZsGreen元件的人成纤维细胞;C、药物筛选:将所述整合有PLOXL1-ZsGreen元件的人成纤维细胞接种于培养基中,将待测物质加入到人成纤维细胞的细胞培养基中;培养;通过检测绿色荧光强度是否增加来判断待测物质对LOXL1基因表达的促进作用。本发明所提供的方法操作简单,具有广泛的适用性。 |
申请公布号 |
CN102965425A |
申请公布日期 |
2013.03.13 |
申请号 |
CN201210413386.X |
申请日期 |
2012.10.26 |
申请人 |
上海市第十人民医院 |
发明人 |
刘小青;应明;蹇丽华 |
分类号 |
C12Q1/02(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I;A61K45/00(2006.01)I;A61K36/9066(2006.01)I;A61K8/97(2006.01)I;A61K8/98(2006.01)I;A61P19/04(2006.01)I;A61Q19/00(2006.01)I;A23L1/30(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/02(2006.01)I |
代理机构 |
深圳市君胜知识产权代理事务所 44268 |
代理人 |
刘文求 |
主权项 |
一种药物筛选方法,用于筛选出对LOXL1基因表达有促进作用的物质,其特征在于,所述药物筛选方法中,包括以下步骤: A、构建由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体:将人LOXL1基因启动子片段克隆到慢病毒载体pLVX‑IRES‑ZsGreen1上,并将慢病毒载体pLVX‑ZsGreen上原有的CMV启动子置换下来,得到二代慢病毒载体pLenti‑PLOXL1‑ZsGreen,所述二代慢病毒载体pLenti‑PLOXL1‑ZsGreen含有由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的元件PLOXL1‑ZsGreen;B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细胞,构建整合有PLOXL1‑ZsGreen元件的人成纤维细胞;C、药物筛选:将所述整合有PLOXL1‑ZsGreen元件的人成纤维细胞接种于培养基中,贴壁过夜;将待测物质溶解于DMSO中并加入到人成纤维细胞的细胞培养基中;经过培养后,检测人成纤维细胞的绿色荧光强度,通过检测绿色荧光强度是否增加来判断待测物质对LOXL1基因表达的促进作用。 |
地址 |
200072 上海市闸北区延长中路301号 |