小反刍兽疫病毒反向遗传操作系统及其应用

摘要

本发明涉及一种小反刍兽疫病毒(PPRV)的反向遗传操作系统及其应用，该系统包含：转录质粒，所述转录质粒能够表达所述小反刍兽疫病毒的基因组全长cDNA序列；一个或多个辅助质粒，所述辅助质粒能够表达所述小反刍兽疫病毒的核蛋白(N)、磷蛋白(P)、和多聚酶大蛋白(L)，和小反刍兽疫病毒的病毒复制许可的宿主细胞。通过上述反向遗传操作系统，成功救获了重组小反刍兽疫病毒。本研究的PPRV反向遗传操作技术平台的建立为进一步开展PPRV活载体疫苗研制及PPRV病毒相关基础研究提供了极佳的技术平台。

主权项

一种小反刍兽疫病毒的反向遗传操作系统，该系统包含：(1)转录质粒，所述转录质粒能够转录所述小反刍兽疫病毒的基因组全长cDNA序列；和(2)一个或多个辅助质粒，所述辅助质粒能够表达所述小反刍兽疫病毒的核蛋白(N)、磷蛋白(P)、和多聚酶大蛋白(L)，其中所述转录质粒还同时转录编码外源蛋白的基因，所述编码外源蛋白的基因位于所述小反刍兽疫病毒的编码磷蛋白(P)的基因和编码基质蛋白(M)的基因之间，其中在编码外源蛋白的基因的基因转录信号终止序列(GE)为额外插入的编码天然PPRV磷蛋白(P)的GE，编码外源蛋白基因的基因转录信号起始序列(GS)为额外插入的编码天然PPRV基质蛋白(M)的GS，此外额外插入了基因间隔序列CTT以隔开外源蛋白基因和M基因，插入的GE、CTT、GS三者全长为101bp。