单增李斯特菌检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及对样品中单增李斯特菌的检测装置及其检测方法。主要解决现有检测单增李斯特菌试剂盒存在的检测样品单一以及检测步骤繁琐、灵敏度底的技术问题。试剂盒由以下试剂组成：试剂A：前处理样品液；试剂B：磁珠；试剂C：DNA提取液；试剂D：PCR反应液，其中含有特定两对引物A08650和A08651；A08653和A08654，其序列分别为：5’GGGGAACCCACTATCTTTAGTC和5’GGGCCTTTCCAGACCGCTTCA；GCCTGCAAGTCCTAAGACGCCAATC和5’CTTGCAACTGCTCTTTAGTAACAGC。本发明主要用于对样品中单增李斯特菌的快速检测。

主权项

一种单增李斯特菌检测试剂盒，其特征在于该试剂盒由以下试剂组成：试剂A：前处理样品液；其组成为0.1 mol/L NaCl， 0.02 mol/LCaCl2，0.1%Tween，0.05% mg/mL胰蛋白酶，25 mg/mL甘露糖，25 mg/mL葡萄糖；试剂B：磁珠；直径为250 nm，表面包被抗李斯特菌的抗体；试剂C：DNA提取液，其组成为20％ SDS，苯酚:氯仿:异戊醇体积比=25:24:1；氯仿:异戊醇体积比=24:1；试剂D：PCR反应液，每管组成为每管单增李斯特菌的50 μL扩增反应体系组成中含0.025mol /L MgCl2 5 μL，2对引物A08650 和A08651各为3 μL，A08653和A08654各为8 μL，PCR 缓冲液5 μL，200 μmol/L脱氧核苷三磷酸1μL，聚合酶0.5μL，DNA 10 μL， ddH2O 6.5 μL；其中含有特定两对引物A08650 和A08651；A08653和A08654，其序列分别为：5’GGGGAACCCACTATCTTTAGTC和5’GGGCCTTTCCAGACCGCTTCA；GCCTGCAAGTCCTAAGACGCCAATC和5’CTTGCAACTGCTCTTTAGTAACAGC，每种引物含量应不少于 5 pmol/L。