天山冻土中产低温中性蛋白酶菌株筛选及培养方法

摘要

本发明是从新疆天山冻土中筛选得到的产低温中性蛋白酶菌株Pseudomonas sp.(假单胞菌属)N-8。该菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈杆状，细胞单个，大小为(0.5-0.8)×(2.0-3.2)μm，有荚膜，有鞭毛；在酪蛋白平板上，菌落呈圆形，乳白色，不透明，表面光滑，边缘整齐，易挑取，产生明显的透明圈。该菌株最适生长温度为20℃；最适生长pH为7.0。通过单因素试验和正交实验对其发酵条件进行优化，确定最佳发酵培养基配方为(g/L)：葡萄糖10，酵母粉8，酪蛋白20，K+0.4，pH7.0；最佳培养条件为：种龄24h，起始pH7，接种量4％，装液量50mL/250mL。

主权项

天山冻土中产低温中性蛋白酶菌株筛选方法，包括以下步骤：(1)初筛：吸取富集后的培养液用倍比稀释法制不同的稀释度移入初筛平板中，涂匀，15℃培养。待菌落长好后，挑选透明圈较大菌株，斜面保存。(2)复筛：以40℃为上限生长温度，即在该温度不生长的菌株为耐冷菌。将初筛得到的产蛋白酶菌株在初筛平板上点样，在40℃不生长的菌株，为试验菌株。以酪蛋白为底物，采用福林(Folin)试剂显色法测定酶活，进一步筛选出产酶能力强的菌株。