特异性抑制SET蛋白表达的shRNA表达载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种特异性抑制SET蛋白表达的shRNA表达载体及其构建方法和应用，所述shRNA表达载体，包括表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点、启动子序列、可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列，所述的可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列正向插入表达载体的多克隆位点序列内；所述可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列依据SET mRNA靶序列设计。本发明利用慢病毒载体为介导构建靶向人SET基因干扰载体，具有转染效率高、干扰效果稳定的特点，克服了质粒或逆转录病毒转染效率低、干扰效果不稳定的缺点，为SET蛋白功能科研领域以及SET蛋白表达异常相关疾病的治疗提供了有力工具。

主权项

一种特异性抑制SET蛋白表达的shRNA表达载体，其特征是：包括表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点、启动子序列、可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列，所述的可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列正向插入表达载体的多克隆位点序列内；所述可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列依据SET mRNA靶序列设计；所述表达载体为慢病毒表达载体pLVX‑shRNA1，所述的多克隆位点包括BamHⅠ和EcoRⅠ限制性酶切位点，所述寡核苷酸链包括Sense+Loop+Antisense+终止序列，并在两端加上BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点；所述的Loop为TTCAAGAGA，所述的终止序列为TTTTTT；所述的SET mRNA靶序列为5'‑GGATGAAGGTGAAGAAGAT‑3'，即SQE ID No 1；所述的寡核苷酸链模板序列包括寡核苷酸正义链序列和寡核苷酸反义链序列，所述正义链序列为：5'‑GATCCGGATGAAGGTGAAGAAGATTTCAAGAGAATCTTCTTCACCTTCATCCTTTTTTG‑3'，即SQE ID No 6；所述反义链序列为：5'‑AATTCAAAAAAGGATGAAGGTGAAGAAGATTCTCTTGAAATCTTCTTCACCTTCATCCG ‑3'，即SQE ID No 7；或者所述的SET mRNA靶序列为5'‑GATGAAGAGGCACTGCATT‑3'，即SQE ID No 4；所述的寡核苷酸链模板序列包括寡核苷酸正义链序列和寡核苷酸反义链序列，所述正义链序列为：5'‑GATCCGATGAAGAGGCACTGCATTTTCAAGAGAAATGCAGTGCCTCTTCATCTTTTTTG ‑3'，即SQE ID No 12；所述反义链序列为：5'‑AATTCAAAAAAGATGAAGAGGCACTGCATTTCTCTTGAAAATGCAGTGCCTCTTCATCG ‑3'，即SQE ID No 13。