羊乳及其乳制品中掺入牛乳的快速免疫学检测方法

摘要

本发明为食品质量与安全的免疫学快速检测技术，具体是一种羊乳及其乳制品中掺入牛乳成分的快速免疫检测方法。为克服现有技术存在的问题，本发明采用牛乳特异性酪蛋白免疫哺乳动物产生抗体，将制备的血清抗体与羊乳的共同抗原反应得到特异性抗体，再将待测羊乳(疑是掺假样品)进行脱脂处理，应用制备特异抗体建立间接ELISA定量出羊乳中掺入的牛乳含量。本发明试剂价格低廉，实验操作方便，不需特殊的仪器设备，适合现场快速检测需要，可以满足有关研究单位，质检部门批量检测相关乳品质量的需要。

主权项

羊乳及其制品中掺入牛乳的免疫学检测方法，其特征在于：包括下述步骤：（1）选择牛乳酪蛋白的特异稳定组分为抗原免疫哺乳动物新西兰白兔产生抗体： （2） 处理兔血清抗体，制备得到检测用高特异性抗体：将免疫血清抗体以抗体浓度2.0mg/ml稀释于PBST缓冲液中，然后与羊乳β‑酪蛋白混合，按1.0mg/ml冻干蛋白加入，置37℃培养2小时，再于4℃下过夜，目的是免疫吸收消除多克隆血清抗体与羊乳中存在的交叉抗原的非特异反应即交叉反应，从而得到特异性高的检测用抗体；（3）用免疫学检测方法进行检测；上述步骤（1）的具体步骤包括①选择牛乳中含量高，组成稳定的β‑酪蛋白作为抗原：牛β‑酪蛋白的制备是将干酪素5g溶于100mlpH12.0的3.3mol/L的尿素中，调节pH4.6，3000r/min离心10分钟得到沉淀和上清液，向上清液加水使尿素浓度稀释至0.5mol/L，再一次离心得到沉淀，后者得到β‑酪蛋白，β‑酪蛋白作为抗原用于免疫及抗体检测的标准；②兔抗牛β‑酪蛋白多克隆抗体的制备：用牛β‑酪蛋白免疫新西兰白兔，以2mg/只为免疫剂量，初次注射用弗式完全佐剂混合，充分乳化后于背部皮下多点注射，10天后，与等量弗式不全佐剂充分乳化后，进行第一次加强免疫，每隔7天后加强一次共三次，到第35天效价达到最高1:104以上并维持一周后，对兔进行颈脉放血，室温放置1小时后，800×g离心分离并收集血清，存放于‑20℃冰箱备用，血清的纯化采用饱和硫酸铵分级沉淀法，依次以50%、40%、33%的饱和硫酸铵纯化一次；上述步骤（2）中羊乳β‑酪蛋白的制备方法是将干酪素5g溶于100mlpH12.0的3.3mol/L的尿素中，调节pH4.6，3000r/min离心10分钟得到沉淀和上清液，向上清液加水使尿素浓度稀释至0.5mol/L，再一次离心得到沉淀，后者得到β‑酪蛋白；上述步骤（3）中的检测方法是应用得到的特异抗体应用间接 ELISA定量检测羊乳及其乳制品中掺入的牛乳成分。