铁皮石斛在非无菌条件下无糖微体快繁技术

摘要

本发明为生物科技领域新的快繁技术，涉及铁皮石斛在非无菌条件下的快速繁殖的方法，其主要步序是通过铁皮石斛种子的无菌萌发、原球茎及幼苗的形成后，即可开始在非无菌下继代快繁，用松树皮粗粉加入1/2MS培养基为基质，不含糖及琼脂，种植铁皮石斛幼苗后放入密闭容器，并通二氧化碳，接近自然条件自养生长，相对在较短时间内促进幼苗的生根、增长和壮苗，其特点为缩短培苗的时间，在继代培养时不用高压灭菌，在常态下即可进行苗的繁殖生长，且不易污染，培植出的苗叶大茎粗为优质苗。与常规铁皮石斛的组培相比，有节省能源消耗和减少人工成本的优点，具有快、省、好三大优点的好方法。

主权项

一种铁皮石斛在非无菌条件下无糖微体繁殖技术，前期的种子无菌萌发、圆球茎的繁殖及种苗的诱导和培养直到长成幼苗均为常规的有糖无菌培养，当铁皮石斛幼苗有2张叶以上时即可进行非无菌条件下的无糖微体繁殖阶段。(1)其实施环境是在密闭的容器(包括各种大小的容器、框架)或房间等，在生产中应用大型容器或房间为宜。(2)培养基质采用松树皮，经过天然阳光下晒干，机械打碎成20目粗粉备用，亦可适当添加无机或有机的其他基质，如蛭石、珍珠岩、沙子、塑料泡沫、石棉、纤维素物质，一般添加的比例为0％‑50％，还可适当加入活性炭和泥炭。(3)培养基液体可用1/2MS、MS、N6、CHB、B5等均可，他们中的成分除不加蔗糖、琼脂、维生素，其他的无机物和有机物均要。(4)激素同时加在培养基液体中，包括NAA及6BA，NAA的浓度为0.1mg/L‑2mg/L，6BA0.2mg/L‑2mg/L。(5)配置培养基其固体基质如松树皮粗粉加培养基液体如1/2MS(含激素)的比例为1：2‑5，以混匀后手抓成团，一压即散，不宜含过多的水份，一般以1：2.5‑3.5为好，配置好的培养基备用。(6)装并或托盘并子或托盘适当用消毒剂如1/2000高锰酸钾溶液或1/1000的新洁而灭，擦洗消毒完后可装入备用的培养基。(7)非无菌条件的快速繁殖将无菌条件下的培养成的幼苗(有2张叶以上)，用常水小心洗去培养基后，晾干即可种入已装有培养基的容器内，并将上述种好苗的容器(并子或托盘)，放置在密封的环境中，并开始通入二氧化碳气体，二氧化碳的浓度为0.1％‑20％，其中以0.5％‑5％为好，光照开始5天为3000Lux，5‑10天为5000Lux，10天后8000Lux以上，但不超过20000Lux，每天光照12h‑14h，密封环境内的温度20℃‑36℃，相对湿度60％‑90％，在上述条件下培养50‑80天，待苗有5片以上，茎有3mm‑5mm以上粗即为大苗。