一种可有效抑制褐变产生的荞麦愈伤组织的增殖培养方法

摘要

本发明公开了一种可有效抑制褐变产生的荞麦愈伤组织的增殖培养方法，该方法通过在荞麦愈伤组织增殖培养前对其进行预培养、以及在增殖培养基中加入柠檬酸和L-半胱氨酸，有效抑制了荞麦愈伤组织在增殖培养中的褐变率，提高了愈伤组织的增殖倍数，为大量、快速生产黄酮类物质（芦丁）提供了一种新途径。

主权项

一种可有效抑制褐变产生的荞麦愈伤组织的增殖培养方法，其特征在于包括如下步骤：（1）荞麦愈伤组织的获得：选取春季播种、生长健康的荞麦的叶柄，将其消毒后切成1～2cm的长度，然后接入愈伤组织诱导培养基MS+6‑BA 0.1～2.0mg/L+2，4‑D 1～6mg/L+IAA 0～1mg/L中，在20～27℃、每天光照8～16小时、光照强度为1500～2500 lx的条件下进行培养，培养基的pH值为6.0、蔗糖30g/L、琼脂6.8 g/L；（2）愈伤组织的预培养：选取无褐变的荞麦愈伤组织，放入培养箱中在温度6～12℃、无光照的条件下预培养7～14天；（3）愈伤组织的增殖培养：将预培养后的愈伤组织切割后，迅速把切口端插入增殖培养基中，先在温度4～8℃、无光照的条件下培养3～5天，再在22～28℃、每天光照6～12 h、光照强度为1200～2000 lx的条件下进行快速增殖培养，所述增殖培养基采用改良的MS为基本培养基，并添加6‑BA 0.5～2.0mg/L、IAA 0.5～4mg/L、柠檬酸6.0～12 mg/L和L‑半胱氨酸50～150mg/L，培养基的pH值为6.0、蔗糖30g/L、琼脂6.8 g/L。