一种分离提取番薯皮中过氧化物酶的方法

摘要

本发明公开了一种分离提取番薯皮中过氧化物酶的方法，包括如下步骤：(1)番薯清洁后取皮，加入pH 7.0-8.0的磷酸盐缓冲液，0-15℃均浆抽提，抽提后过滤，得滤液；(2)取滤液边搅拌边加入双水相萃取剂固体硫酸铵和PEG6000，使硫酸铵的质量百分比浓度为20-30％，PEG6000的质量百分比浓度为6-8％，充分搅拌溶解后，0-15℃静置分层，取下层溶液即为粗酶液；(3)由步骤(2)得到的粗酶液直接经Phenyl Sepharose6fast flow疏水层析，上样后用0-1mol/L的硫酸铵水溶液梯度洗脱，收集呈酶活性的洗脱液后冻干；(4)冻干粉经凝胶层析和离子层析得到所述的过氧化物酶。本发明更好地解决材料来源的问题并可以提高效率和酶活。

主权项

一种分离提取番薯皮中过氧化物酶的方法，包括如下步骤：（1）取番薯，清洗，收集番薯皮，先加pH 7.0‑8.0磷酸盐缓冲液绞碎，绞碎过程中保持温度在4℃，然后搅拌均匀后，于4℃浸提，充分浸提后过滤收集滤液，残渣重复提取，合并滤液；滤液于4℃离心去除淀粉和小颗粒组织颗粒，收集上清液；所述pH 7.0‑8.0的磷酸盐缓冲液的体积用量以番薯皮的质量计为5‑10mL/g；（2）取滤液边搅拌边加入双水相萃取剂固体硫酸铵和PEG6000，使硫酸铵的质量百分比浓度为30%，PEG6000的质量百分比浓度为8%，充分搅拌溶解后，0‑15℃静置分层，取下层溶液即为粗酶液；（3）由步骤（2）得到的粗酶液直接经Phenyl Sepharose6 fast flow疏水层析，上样后用0‑1mol/L的硫酸铵水溶液梯度洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，冻干；（4）步骤（3）所得冻干粉通过下列a或者b的方法处理，得到过氧化物酶制品；a.冻干粉溶于生理盐水，经Sepharose CL‑6B凝胶层析，用生理盐水洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，冻干；冻干粉溶解于pH 7.1‑8.5的Tris‑HCl缓冲液中，对Tris‑HCl缓冲液透析，透析液上样，经ToYoPEAPL DEAE‑650M离子层析，用0‑1mol/L氯化钠水溶液线性洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，透析，冻干，即为过氧化物酶制品；b.冻干粉溶解于pH 7.1‑8.5的Tris‑HCl缓冲液中，对Tris‑HCl缓冲液透析，透析液上样，经ToYoPEAPL DEAE‑650M离子层析，用0‑1mol/L氯化钠水溶液线性洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，冻干；冻干粉溶于生理盐水，经Sepharose CL‑6B凝胶层析，用生理盐水洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，透析，冻干，即为过氧化物酶制品。