基因扩增方法

摘要

本发明提供为了高速扩增基因而特别构建的双链DNA以及使用所述双链DNA的基因扩增方法以及蛋白质的合成方法。本发明的扩增体系为了有效地诱导被称为双滚环式复制(DRCR)的复制反应而利用了Cre-lox体系等的位点特异性重组酶及其靶序列。在动物细胞等细胞内构建图2(a)所示结构的复制单元，当复制叉在一对靶序列(lox序列)之间进行时通过位点特异性重组酶引起重组，利用该重组而引起DRCR诱导。

主权项

一种以a‑b‑X‑c‑d表示的双链DNA，式中，a和b中的一个表示包含位点特异性重组酶的第一靶序列的双链DNA片段，另一个表示使所述第一靶序列在反方向上排列而成的双链DNA片段；c和d中的一个表示包含位点特异性重组酶的第二靶序列的双链DNA片段，另一个表示使所述第二靶序列在反方向上排列而成的双链DNA片段；在b‑c之间插入复制起始点，在a‑d之间的任一处插入至少一个扩增目标基因；X表示复制起始点；并且，在所述片段之间也可以插入任意的DNA序列；所述位点特异性重组酶的第一靶序列与第二靶序列不同；所述位点特异性重组酶为Cre重组酶、Flp重组酶或phiC31整合酶，当所述位点特异性重组酶为Cre重组酶时，所述第一靶序列和第二靶序列分别选自loxP、lox511、lox5171、lox2272、lox2372、loxm2、loxFAS、lox71以及lox66；当所述位点特异性重组酶为Flp重组酶时，所述第一靶序列和第二靶序列分别选自FRT、F3、F5、FRT突变体—10以及FRT突变体+10；当所述位点特异性重组酶为phiC31整合酶时，所述第一靶序列和第二靶序列分别选自attB以及attP。