一种透明质酸菌种复壮新方法

摘要

本发明涉及一种透明质酸菌种复壮新方法，该方法利用常见的动物材料（羊血）和植物材料（土豆和玉米）通过特殊的处理方法得到复壮剂，具体步骤：先将土豆和玉米混合绞碎，再加入水；加热至沸腾2.5-3.5小时，并蒸发掉混合物体积50%-70%的水；然后过滤得到浸提液备用；最后把无菌脱纤维绵羊血加入到浸提液中混合均匀制得复壮剂。复状剂按一定比例加入到透明质酸菌种选择固体培养基中，制成复壮平板，然后把退化的菌种用接种环接到该平板中进行划线分离，培养后获得性能良好的透明质酸菌种。本发明复壮剂原料易得，制作和使用过程简单，使用该方法使菌种的复壮机率提高10倍以上，而且得到的菌种性能良好，产酸率提高30%左右。

主权项

一种透明质酸菌种复壮新方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）复壮剂的制备：a1、先取土豆切碎成粒度小于5mm的颗粒状，然后将土豆和玉米按重量比为3‑4：1混合绞碎得到复壮剂原料，再按1g复壮剂原料加入1.8‑2.2mL水计向复壮剂原料中加入水，得到混合物；b1、将步骤a1得到的混合物加热至沸腾，然后继续加热使混合物保持沸腾2.5‑3.5小时，并蒸发掉混合物体积50%‑70%的水，加热过程每间隔20‑30分钟对物料进行搅拌防止发焦；c1、在无菌操作台上用灭菌的滤布过滤得到浸提液，冷却到常温备用； d1、按羊血与浸提液体积比为2：7‑8计把无菌脱纤维绵羊血加入到浸提液中，混合均匀制得复壮剂，放入2℃‑6℃的冰箱内保存；（2）透明质酸菌种复壮：a2、配制透明质酸固体培养基，高温灭菌后冷却至50℃‑60℃；b2、在无菌操作台上将固体培养基体积12‑16%的复壮剂加入到固体培养基中，摇匀后再倒到平板中冷却到室温，得到复壮平板；c2、把退化的透明质酸菌种斜面或甘油管取出活化25‑35分钟，然后用接种环挑出退化菌种在复壮平板上划线；d2、把划好线的复壮平板放在培养箱中培养30‑40小时，直到菌种在平板上出现透明质酸单菌落，再用接种环挑出单菌落进行斜面培养，培养好后得到复壮好的菌种放入冰箱进行保存。