一种微生物混合发酵生产液体纤维素酶的方法

摘要

本发明涉及一种微生物混合发酵生产液体纤维素酶的方法，是以绿色木霉和黑曲霉为纤维素酶生产菌，接种孢子液或种子液液体培养基中，通过控制培养基组成、混菌培养过程两菌生长量及培养条件、培养方式，生产高活性纤维素酶，本发明提供的方法对提高纤维素酶活力、完善酶系组分及缩短发酵时间均有良好的效果，且简单易行、具有广阔的发展前景；而且，在开发利用秸秆等天然纤维素资源的同时，无环境污染，是促进秸秆乙醇产业化的有效手段。

主权项

一种微生物混合发酵生产液体纤维素酶的方法，其特征在于，它包括如下步骤：步骤1，选用绿色木霉（Trichoderma  viride）及黑曲霉（Aspergillus niger）为生产菌株，分别经斜面试管培养、摇瓶扩大培养或种子罐扩大培养，分别得到绿色木霉及黑曲霉的二级液体种子；所述斜面试管培养方法为：将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块，置于1L水中，煮沸30分钟，8层纱布过滤，滤液中加入琼脂18克，不断搅拌至琼脂完全融化，停止加热；迅速加入20g葡萄糖，搅拌使其溶解，补足水分至1000mL，适量分装至试管或茄子瓶中，盖上棉塞，于121℃下高压蒸汽灭菌20分钟；分别划线接种绿色木霉及黑曲霉菌株，于28～30℃下培养5～7天；步骤2，先将绿色木霉的二级液体种子用液体发酵培养基培养，按液体发酵培养基体积的8～10%接种绿色木霉的二级液体种子，28～32℃下通气培养48～72h后；再按液体发酵培养基体积的4～6%接种黑曲霉二级液体种子，28～30℃下通气培养72～96h；于接种黑曲霉后12～24h，开始连续加入补料培养基，控制还原糖含量在0.08～0.10%，直至发酵结束，将发酵液过滤即得液态纤维素酶粗酶液。