以金磁微粒为载体检测抗双链DNA抗体的方法

摘要

本发明涉及一种以金磁微粒为载体，运用间接ELISA法、免疫荧光法或化学发光法检测抗双链DNA抗体的方法。本方法包括以下步骤：(1)将金磁微粒与双链DNA相混合，在一定条件下双链DNA固定在金磁微粒表面或运用金磁微粒从人全血、唾液、精液或质粒中提取DNA并固定在金磁微粒表面；其中金磁微粒由具有超顺磁性的核心部分和组装层部分构成，核心部分为磁性微粒，组装层部分为纳米级贵金属颗粒；(2)运用间接ELISA法、免疫荧光法或化学发光法检测待测样品中存在的抗双链DNA抗体。本发明检测方法具有高度特异性、灵敏度高、费用低廉、操作简便快速、以及应用范围广等优点。

主权项

一种以金磁微粒为载体检测抗双链DNA抗体的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1]DNA在金磁微粒表面的固定：取金磁微粒加入离心管中，磁性分离弃上清后，用偶联缓冲液洗涤金磁微粒，磁性分离弃上清后加入纯化的天然双链DNA或者质粒DNA及偶联缓冲液于金磁微粒中，在20～40℃条件下充分反应20～40min，形成金磁微粒‑DNA复合物；或者将全血、唾液、精液或质粒制成溶液体系，用金磁微粒从中提取DNA并使其固定在金磁微粒表面；所述偶联缓冲液为0.5×～10×的pH=5.0～8.0的PBS，或者5mM～10M的pH=9.0～11.0的CBS，或者5mM～10M的pH=7.0～9.0的Tris‑HCl缓冲液，或者5mM～10M的pH=3.6～5.6的醋酸盐缓冲液，或者5mM～10M的pH=3.0～7.0的柠檬酸盐缓冲液，或者5mM～10M的pH=7.0～9.0的TBS缓冲液，或者为在10～25%之间的聚乙二醇（PEG）6000～10000加入0.5～5.0M的盐，所述盐是氯化钠、氯化锂、氯化钡、氯化钾、氯化钙、氯化镁或氯化铯；2]金磁微粒‑DNA复合物中金磁微粒的封闭：将金磁微粒磁性分离弃上清后，加入封闭剂于离心管中，在20～40℃条件下充分反应1～2h，取出，4℃过夜；所述封闭剂为无关蛋白和上述偶联缓冲液的混合溶液，所述无关蛋白为1%～10%的牛血清白蛋白、1%～10%赖氨酸、1%～10%脱脂奶粉、1%～10%乙醇胺或1%～10%动物血清中的一种或多种；3]金磁微粒的清洗：用清洗缓冲液清洗封闭后的金磁微粒；所述清洗缓冲液为偶联缓冲液或者含有0.02%～0.2%吐温的偶联缓冲液；4]金磁微粒的保存：将清洗完毕的金磁微粒加入保存缓冲液，4℃保存，备用；所述保存缓冲液为偶联缓冲液或者加入防腐剂和保护剂的偶联缓冲液，所述防腐剂为0.01%～0.1%的叠氮钠或者0.01%～0.1%的硫柳汞，所述保护剂为0.05%～1%的BSA、0.05%～1%的动物血清或者0.05%～1%的蛋白酶抑制剂；5]抗双链DNA抗体的检测：以清洗后的金磁微粒表面的DNA为抗原，运用间接ELISA法、免疫荧光法或化学发光法检测抗双链DNA抗体。