新型微核糖核酸定量PCR（聚合酶链式反应）检测方法

摘要

一种新的微小RNA(microRNAs)和小干扰RNA(siRNAs)定量PCR检测方法。它应用逆转录引物的5’端和3’端临近碱基互补形成茎环状结构，利用逆转录引物3’端与靶核酸互补结合，应用逆转录酶进行逆转录反应；以逆转录引物中的部分序列作为PCR引物之一，对逆转录反应得到的cDNA进行扩增；应用荧光标记的分子信标探针对定量PCR进行实时监测。

主权项

一种用于非诊断目的的非编码RNA的检测方法，其特征在于：(1)设计逆转录引物的5’端和3’端临近碱基互补，以形成茎环状结构；利用茎环状逆转录引物的3’端碱基与靶核酸分子配对结合；应用逆转录酶进行逆转录反应，合成靶核酸分子的互补DNA链；(2)应用茎环状逆转录引物中的部分序列作为定量PCR的引物之一；(3)应用荧光标记的分子信标探针对逆转录得到的cDNA进行定量PCR检测分析；分子信标探针的5’端与逆转录引物的3’端临近碱基具有相同序列；探针具有和靶核酸相同或互补的序列，探针的5’端和3’端序列互补以形成茎环状结构；探针标记有荧光基团。