大肠菌群单管定量快速检测方法

摘要

本发明公开了一种大肠菌群单管定量快速检测方法，它包括以下步骤：特异性检测培养基的配制；样品接种；将接种的样品在35℃-44℃下培养8-15h；以8000-12000rpm速度离心5-10min；用分光光度计测定上清液在405nm处的吸光度值；根据公式计算菌浓度。本发明应用分光光度计测定培养液的吸光度值，比目测法灵敏很多，可以大大缩短培养时间。采用单管定量检测技术，一个样品只需1管培养液，比最大可能数法节约很多试剂、耗材，而且检测结果更加快速、稳定、灵敏度高。

主权项

一种大肠菌群单管定量快速检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：特异性检测培养基的配制：所述的培养基为含邻硝基酚半乳糖甙的培养液，其组分和重量如下：ONPG 300‑700mg，胰蛋白胨8‑12g，(NH4)2SO4 3‑8g，Mn(SO4)2 0.2‑0.7mg；ZnSO4 0.2‑0.7mg，Na2SO3 20‑60mg，NaCl 8‑12g，CaCl2 40‑60mg，KH2PO4 0.7‑1.2g，Na2HPO46.0‑6.5g，蒸馏水1000ml，pH值7.0‑7.5；样品接种：将接种的样品在42℃下培养10h、11h、12h、13h或14h，以8000‑12000rpm速度离心5‑10min，用分光光度计测定上清液在405nm处的吸光度值，根据以下公式计算菌浓度：42℃培养10h的公式：吸光度值(y)＝0.5809×1g菌浓度‑1.4801，线性检测范围：103.522‑106.522cfu/ml；42℃培养11h的公式：吸光度值(y)＝0.5092×1g菌浓度‑0.5521，线性检测范围：101.522‑105.522cfu/ml；42℃培养12h的公式：吸光度值(y)＝0.4881×1g菌浓度+0.0014，线性检测范围：0‑103.522cfu/ml；42℃培养13h的公式：吸光度值(y)＝0.7072×1g菌浓度+0.0415，线性检测范围：0‑102.522cfu/ml；42℃培养14h的公式：吸光度值(y)＝0.8677×1g菌浓度+0.187，线性检测范围：0‑102.522cfu/ml。