一种从黄霉素预混剂中提取、纯化制备黄霉素A对照品的方法

摘要

本发明公开了一种从黄霉素预混剂中提取、纯化制备黄霉素A对照品的方法。该方法包括黄霉素的提取、浓缩、纯化、干燥和纯度鉴定方法。根据本发明制备的黄霉素A纯度达到93%以上。本发明提供的黄霉素A对照品制备方法具有步骤简便，成本低廉和纯度高的优点。

主权项

一种从黄霉素预混剂中提取、纯化制备黄霉素A对照品的方法，包括如下步骤：（1）提取以每mL甲醇与0.4g黄霉素预混剂的比例混合二者并加入离心试管中，将离心试管置于超声提取器中，超声提取30min，每10min振荡一次，8000转/min下离心3min，将上清液转移至旋转蒸发瓶中；在残渣中加入甲醇按照上述步骤，重复提取2次；合并每次提取的上清液，40℃水浴旋转蒸发浓缩至干，得到提取物；（2）SPE纯化依次用4mL乙酸乙酯、4mL甲醇和4mL水活化C18固相萃取小柱，控制流速为1～2mL/min；将提取物用10mL超纯水溶解，并全部加于固相萃取小柱上，并挤干柱床上的水分，依次用4mL5%甲醇溶液、4mL正己烷与二氯甲烷的混合溶液、4mL乙酸乙酯和6mL乙酸乙酯与甲醇的混合溶液淋洗除杂；最后用6mL甲醇将黄霉素从固相萃取小柱中解析，将解析液于40℃水浴旋转蒸发浓缩至干，得到黄霉素纯化产物；将纯化产物转移至称量皿中，‑75℃真空冷冻干燥5h，即得黄褐色黄霉素A粗产品；（3）HPLC纯化称取黄霉素A粗产品，用流动相溶解并稀释成2～10mg/mL，过0.45mm滤膜，按下列条件分离纯化，收集洗脱液；分离纯化条件：色谱柱：Agela Technologies Venusil MP C18，250 mm × 4.6 mm，5 mm;柱温：30℃；流动相：0.2%甲酸铵：乙腈，体积比为55:45；流速：1.0mL/min；进样量：50 mL；检验波长：258nm；（4）浓缩、干燥将收集的洗脱液减压浓缩去除乙腈，得到浓缩液；控制流速1～2 mL/min，将浓缩液全部过C18固相萃取小柱；用10mL超纯水淋洗C18固相萃取小柱；用10mL甲醇解析C18固相萃取小柱，直至解析液中没有黄霉素A；将收集解析液在40℃水浴下氮吹仪浓缩至干，转移至称量皿后真空冷冻干燥，即得淡黄色的黄霉素A对照品；（5）纯度鉴定称取一定量的黄霉素A对照品，用水溶解，用紫外分光光度计测定258nm下的吸光度，计算黄霉素A的纯度。