主权项 |
一种抑制烟草愈伤组织继代培养过程中褐化的方法,其步骤是:A:配制KCMS培养基:培养基的成分组成及工作浓度如下:大量元素为:硝酸铵1.65g/L、硝酸钾1.9 g/L、二水合氯化钙0.44 g/L、七水合硫酸镁0.37 g/L、磷酸二氢钾 0.17 g/L;微量元素:碘化钾0.83 mg/L、硼酸6.2 mg/L、四水合硫酸锰22.3 mg/L、七水合硫酸锌8.6 mg/L、二水合锰酸钠0.25 mg/L、五水合硫酸铜0.025 mg/L、六水合氯化钴 0.025 mg/L;铁盐:七水合硫酸亚铁27.8 mg/L、二水合乙二胺四乙酸二钠37.3 mg/L;肌醇0.5 mg/L;维生素B1 1.3 mg/L;激素:2,4‑二氯苯氧乙酸0.2mg/L、激动素0.1 mg/L;聚乙烯基吡咯烷酮0.5g/L;磷酸二氢钾200 mg/L;琼脂8‑10g/L;蔗糖30g/L;灭菌前将培养基pH值调节至5.6‑6;B:KCMS培养基灭菌:将A步骤中所述KCMS培养基成分分成三部分灭菌,三部分分别为铁盐:七水合硫酸铁27.8 mg/L、二水合乙二胺四乙酸二钠37.3 mg/L;微量元素:碘化钾 0.83 mg/L、硼酸6.2 mg/L、四水合硫酸锰22.3 mg/L、七水合硫酸锌8.6 mg/L、二水合锰酸钠0.25 mg/L、五水合硫酸铜0.025 mg/L、六水合氯化钴0.025 mg/L和KCMS培养基其他营养成分:大量元素、肌醇、维生素B1、2,4‑二氯苯氧乙酸、激动素、聚乙烯基吡咯烷酮、磷酸二氢钾、琼脂和蔗糖,以上三部分KCMS培养基营养成分分别进行湿热灭菌,铁盐部分灭菌条件为 121.3℃30min,微量元素部分灭菌条件为121.3℃30min,KCMS培养基其他营养成分部分灭菌条件为121.3℃20min,灭菌完成后以上三部分KCMS培养基营养成分均冷却至50‑60℃,在无菌操作台上混合均匀,并分装至100 mL三角瓶,每瓶分装20 mL KCMS培养基;C:待B步骤中100 mL三角瓶内KCMS培养基自然冷却至室温,并黑暗水平搁置2‑3天后,将烟草愈伤组织转移到凝固好的KCMS培养基表面,放置在光照培养箱中培养,培养条件为:22‑26h黑暗,培养箱温度24‑26℃,培养箱湿度18%‑20%,20‑24天继代一次。 |