一种溴氰菊酯人工抗原的合成方法及测定方法

摘要

本发明公开了一种溴氰菊酯人工抗原的合成方法，它包括(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲酰氯的合成、3-(4-硝基苯氧基)苯甲醛的合成、[3-(4-硝基苯氧基)苯基]氰基甲醇的合成、(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲酸[3-(4-硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯的合成、人工半抗原(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲酸[3-(4-氨基苯氧基)苯基]氰基甲酯(称为DM)的合成和人工抗原的合成步骤，人工抗原的测定。

主权项

一种溴氰菊酯人工抗原的合成方法，其特征在于所述合成方法包括下列步骤：1)、(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酰氯的合成：向反应器中加入含30g，0.1mol(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酸的三氯甲烷溶液30ml和0.4mol的氯化亚砜28ml，油浴条件下控温60‑65℃反应2h，除去溶剂和氯化亚砜，得到黄色油状产品(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酰氯；2)、3‑(4‑硝基苯氧基)苯甲醛的合成：在50ml的反应瓶中加入2.68g，0.022mol 3‑羟基苯甲醛、3.78g，0.024mol对硝基氯苯和10ml二甲基甲酰胺，以下称DMF，搅拌溶解，加入3.30g，0.024mol无水碳酸钾，油浴控温120℃，反应2小时至化合物三羟基苯甲醛反应完全，薄层色谱跟踪；趁热滤出固体并用少量DMF洗涤，滤液浓缩后得黑色固体；所得粗产品用CH2C12，硅胶柱脱色得黄色粉末3‑(4‑硝基苯氧基)苯甲醛，甲醇重结晶；3)、[3‑(4‑硝基苯氧基)苯基]氰基甲醇的合成：在50ml的反应瓶中，加入4.90g，0.020mo13‑(4‑硝基苯氧基)‑苯甲醛、12ml氯仿溶液和0.64g，0.002mol碘化锌，氮气保护；混合物冰浴冷却后，加入2.2g，0.022mol的三甲基氰基硅烷，反应半个小时，撤去冰浴，室温搅拌2小时至薄层色谱跟踪化合物3‑(4‑硝基苯氧基)苯甲醛反应完全后，将反应液转入250ml锥形瓶中；向反应混合物中加入60ml甘醇二甲醚和15ml，3mol/1盐酸溶液，剧烈搅拌5min，加60ml水稀释，氯丁烷萃取两次；有机相由无水硫酸镁干燥，蒸馏得到黑色油状物氰基醇；产品用CH2C12溶解后，30g硅胶柱，4∶1正已烷/二氯甲烷淋洗，脱色纯化得浅黄色油状物[3‑(4‑硝基苯氧基)苯基]氰基甲醇；4)、(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酸[3‑(4‑硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯的合成：步骤3得到的氰基醇2.7g在10ml 氯仿溶液中冰浴搅拌，加入6ml含有3.5g步骤1得到的酰氯的氯仿溶液，完毕后滴加3ml含有1ml，1.25mmol吡啶的氯仿溶液；室温搅拌30min后，混合物依次用水、1mol/L HCl、饱和的NaHCO3洗涤，所得料液用无水硫酸镁干燥，蒸馏得粘稠油状物，产品用60g硅胶，10‑100％石油醚/乙酸乙酯柱层析，得产品(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酸[3‑(4‑硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯，为白色固体；5)、人工半抗原(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酸[3‑(4‑氨基苯氧基)苯基]氰基甲酯的合成：反应器中，将4.3g，19.06mmol的SnCl2加入到含有2.10g，3.81mmol(1R，3R)‑3‑(2，2‑二溴乙烯基)‑2，2‑二甲基环丙基甲酸[3‑(4‑硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯的20ml乙醇溶液中；氮气保护下，控温70‑75℃搅拌反应8.0h，冷却后用水稀释，加入乙醚和3.2g C盐溶液，然后分开15次加入固体NaHCO38.0g，过滤料液，所得固体用乙酸乙酯洗涤，有机相水洗，无水硫酸钠干燥后蒸馏得到红色油状物，产品用40g硅胶，25‑100％石油醚/乙酸乙酯柱层析，得到浅黄色固体，为半抗原，称为DM；6)、人工抗原的合成：称取半抗原DM 0.0261g，0.05mmol放入50ml小烧杯中，冰浴条件下加入300μL无水乙醇，搅拌溶解；然后向溶液中加入1M盐酸0.5ml和0.2M的亚硝酸钠0.4ml，搅拌均匀，最后逐滴滴加0.4ml N，N‑二甲基酰胺到上述反应液中；称量45mg的牛血清白蛋白，以下称BSA，放入50ml小烧杯中，加入5ml，0.2M，pH＝8.7的硼酸缓冲溶液和1.2ml N，N‑二甲基酰胺的混合液溶解；冰浴条件下，将具有活性的半抗原溶液逐滴的加入到搅拌中的蛋白质中，50min滴加完毕；反应混和液在冰浴下搅拌继续反应60min，反应完全后装入透析袋中，4℃下，pH＝7.4磷酸缓冲盐溶液中透析72h；离心，取上清液得人工抗原，称为DM‑BSA。