一种提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法

摘要

本发明涉及一种提高法夫酵母虾青素含量的法夫酵母培养方法。该方法包括法夫酵母野生菌株JCM9042菌种固体种子制备、一级种子培养、二级种子培养与发酵培养以及发酵液的虾青素含量测定。本发明的培养方法使用麦角甾醇合成抑制剂，可明显地促进法夫酵母中虾青素的积累，与不使用麦角甾醇合成抑制剂相比，本发明的培养方法能够提高虾青素的含量高达3-8倍以上。本发明的方法简单易行，麦角甾醇合成抑制剂及培养基成本低廉，有效地降低虾青素的生产成本，有利于工业化培养。

主权项

一种提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法，其特征在于该方法的步骤如下：A、PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后，加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得到PDA液体培养基，往该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、凝固后得到PDA固体培养基；B、配制种子培养基：将36‑44g葡萄糖、3.6‑4.4g酵母粉、2.0‑2.8g尿素、1.6‑2.2g磷酸二氢钾、0.4‑0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶至1000ml，调节pH至5.8‑6.2；C、配制发酵培养基：将100‑120g葡萄糖、3.6‑4.4g酵母粉、0.4‑0.8g尿素、1.6‑2.2g磷酸二氢钾、0.4‑0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶至1000ml，调节pH至5.8‑6.2；D、培养条件与方法(1)种子制备：将含有法夫酵母野生菌株JCM9042的菌液涂布在步骤(A)制备的PDA固体培养基平板上，在温度20‑23℃下进行斜面培养70‑80小时，然后置于温度3‑5℃下保存；(2)一级种子培养：从上述(1)得到的法夫酵母野生菌株JCM9042固体斜面上挑取菌苔接种入所述种子培养基中，在温度20‑23℃及摇床振荡速度180‑220rpm下培养3‑4天；(3)二级种子培养：上述(2)得到的一级种子以种子培养基体积计按照8‑12％接种量加到所述的种子培养基中，在温度20‑23℃与振荡速度180‑220rpm下培养34‑40小时；(4)发酵培养：上述(3)得到的二级种子以发酵培养基体积计按照4‑8％接种量加到所述的发酵培养基中，在温度20‑23℃与振荡速度180‑200rpm下培养14‑18小时，加入麦角甾醇合成抑制剂，再接着培养 88‑112小时，得到法夫酵母野生菌株JCM9042的发酵液；所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂，所述的麦角甾醇合成抑制剂加入量达到在发酵培养基中的浓度为10‑100mg/L。