一种以蛋白酶作为烟草加工辅助的酶制剂及制备、使用方法

摘要

一种以蛋白酶作为烟草加工辅助的酶制剂及制备、使用方法，属于烟草复烤前添加的提高烟草品级的酶制剂。本发明将已知蛋白酶酶活力的酶源进行除杂精制，预先用EDTA络合剂除去酶液中的金属离子，使失去活性中心离子的酶以可逆酶活性的钝化不显示酶活力的状态存在，经浓缩得到制剂。本发明中性蛋白酶适应较宽pH范围的烟草处理对象，使用时用水稀释替代片烟复烤第二润叶用水，改善烟草品质。

主权项

一种制备以蛋白酶作为烟草加工辅助的酶制剂的方法，该制剂的蛋白酶为pH5.5～9.5枯草芽孢杆菌As1.398发酵生产的中性蛋白酶，酶活力为36000U/mL，其特征是该酶制剂的制备方法包括以下步骤：（1）将以上微生物来源的中性蛋白酶作为粗品进行精制，即，将蛋白酶粗制品固体以缓冲液溶解，二者比例（W/V）为1g︰10～20mL，3500r/min离心20min，取上清液，加入(NH4)2SO4使其在上清液中的终浓度为42％，静置12h后，4℃ 15000r/min离心30min，取上清液，补加浓度（W/V）为10%的(NH4)2SO4过夜，再一次4℃ 15000r/min离心30min，收集沉淀，将第二次离心后的沉淀与第三次离心后的沉淀合并； （2）EDTA使蛋白酶酶活性呈可逆的钝化，即，将⑴合并的沉淀用步骤（1）所述的缓冲液用量的一半充分溶解后，加入含0.1% EDTA步骤（1）所述的缓冲液，补体积至步骤（1）所述的缓冲液体积，静置2h，离心，得到酶活性被钝化的上清液； （3）在获得的上清液中加入浓度0.01%的蔗糖低聚物，上清液与蔗糖低聚物体积比为100 mL︰1 mL，经‑8℃冷冻干燥浓缩8～10倍得浓缩酶制剂。