靶序列的扩增方法、多态性检测方法以及其中使用的试剂

摘要

本发明的目的在于提供抑制由于引物的错误退火而造成的扩增的扩增方法。在含有显示多态性的靶位点的靶序列的扩增中，使用引物X1和X2。X1为如下引物：具有序列A1’和序列E1，A1’为与上述模板核酸中的部分序列A1互补的序列，其3’区域具有与A1的5’区域中的上述靶位点的第1碱基x1互补的碱基x1’，E1为与和上述模板核酸中A1的3’末端邻接的部分序列B1非互补的序列、结合在A1’的5’末端。X2为如下引物：具有序列A2’，A2’为与上述模板核酸中的部分序列A2互补的序列，其3’区域具有与A2的5’区域的上述靶位点的第2碱基x2互补的碱基x2’。X1和X2均在3’区域具有与靶位点互补的碱基。利用这样的引物，在仅靶位点为第1碱基x1的模板的情况下，能够防止具有第2碱基x2的靶序列的误扩增。由此，能够抑制第2碱基x2的多态性的假阳性。

主权项

靶序列的扩增方法，其特征在于，包括在含有下述引物(X1)和下述引物(X2)的反应体系中，扩增模板核酸中的靶序列的扩增步骤，上述靶序列为含有显示多态性的靶位点的序列，上述靶位点的碱基(x)为第1碱基(x1)或第2碱基(x2)，引物(X1)为如下引物：具有序列(A1’)和序列(E1)，上述序列(A1’)为与上述模板核酸中的部分序列(A1)互补的序列，其3’区域具有与上述部分序列(A1)的5’区域中的上述靶位点的第1碱基(x1)互补的碱基(x1’)，上述序列(E1)为与和上述模板核酸中的上述部分序列(A1)的3’末端邻接的部分序列(B1)非互补的序列，结合在上述序列(A1’)的5’末端，引物(X2)为如下引物：具有序列(A2’)，上述序列(A2’)为与上述模板核酸中的部分序列(A2)互补的序列，其3’区域具有与上述部分序列(A2)的5’区域中的上述靶位点的第2碱基(x2)互补的碱基(x2’)。