通过定向进化构建的活力提高的脂肪酶突变体

摘要

通过定向进化构建的活力提高的脂肪酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了一种由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M 201021脂肪酶基因经定向进化而获得的一系列脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中，涉及到的氨基酸突变为Ala129Ser、Lys161Arg、Thr195Tyr、Ala230Thr、Val261Gly、Lys322Arg、Ser373Asn以及上述氨基酸两个、三个或四个突变的组合。以转换数Kcat表示，这些突变体的酶活较出发菌株得到了提高。

主权项

1.通过定向进化构建的活力提高的脂肪酶突变体，其特征是由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M 201021脂肪酶基因，其Genbank登录号EF405962，运用易错PCR方法，通过多轮重组和定点突变，经定向进化而获得的脂肪酶突变体，在突变体的氨基酸序列中，包含氨基酸突变Ala129Ser；以转换数K_cat表示，脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高；突变体的测序结果及其K_cat提高的倍数为：。