一种快速高通量生产重组蛋白的平台

摘要

本发明涉及一种快速高通量生产重组蛋白的平台，包括以下步骤：构建含有编码EBN病毒的EBNA基因OriP复制子的重组载体；获得含有病毒的CHO-K1细胞株；将培养的CHO-K1细胞株与聚乙烯亚胺储液混合，得到转染试剂，于多联细胞发酵罐中培养；将转染试剂与带有目的基因的质粒混合转染培养；收集纯化培养的细胞；用Elisa鉴定收集纯化细胞培养物并用亲和层析纯化方法纯化蛋白。本发明的有益效果是：转染并随机整合了EBV病毒蛋白编码基因，使细胞内含OriP的动物细胞表达载体复制2～3代，增加了1倍以上的表达时间；采用多联细胞发酵罐提高了通量，能够快速高通量地生产毫克到克级的蛋白，并且效率高，结果准确。

主权项

一种快速高通量生产重组蛋白的平台，其特征在于，包括以下步骤：1）构建含有编码EBN病毒的EBNA基因OriP复制子的重组载体；2）将重组载体转化入CHO‑K1细胞菌株中，筛选得到稳定表达EBNA蛋白的CHO‑K1细胞株；3）在培养基中培养CHO‑K1细胞株，并用0.2～0.5X106个细胞/mL的接种密度扩大至多联反应器的细胞发酵罐中，搅拌转速维持80rpm,溶氧控制下限30～40%，温度34～37度，pH维持6.8～7.2，进行培养；4）将培养至细胞密度为0.8～1.2X106个细胞/mL的CHO‑K1细胞株进行转染；5）将转染试剂与1～5μg的带有目的基因的质粒混合，震荡摇匀后，于室温孵育5～15分钟，转入细胞培养物，同时于20～50rpm的低转速培养2小时后，再上升到60～120rpm的转速培养；6）培养5～7天后收集并纯化，同时准备下一批转染直到所有3批结束，将收集的3批纯化合并；7）用Elisa鉴定收集纯化的细胞培养物上清或细胞裂解物得到表达产量，并用亲和层析纯化方法纯化，得到产物蛋白。