感染熊蜂的微孢子虫的分子检测技术

摘要

感染熊蜂的微孢子虫的分子检测技术。属于动物检验检疫技术领域，具体地说涉及一种准确、快速的检测进出口熊蜂上的微孢子虫的分子检验技术领域。本发明的特征是：采用Chelex-100法提取DNA，用特异性引物进行一次PCR，扩增出540bp的微孢子虫SSUrRNA基因片段，然后用限制性内切酶Afa I对PCR产物进行酶切，利用2.0％琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，直接根据酶切产物片断的长度，即可检测出寄生在熊蜂身上的微孢子虫的种类，本发明可应用于国内外进出口熊蜂的病原物微孢子虫的检验检疫。

主权项

一种检验检疫熊蜂的病原微孢子虫的分子检测方法，其特征在于：1)采用Chelex‑100法提取DNA；2)用特异引物SSUrRNA‑fl：5’‑CACCAGGTTGATTCTGCCT‑3’和SSUrRNA‑r1b：5’‑TGTTCGTCCAGTCAGGGTCGTCA‑3’PCR扩增微孢子虫540bp的SSUrRNA基因片段；3)用限制性内切酶Afa I酶切PCR产物，利用2.0％琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，根据酶切产物片断的长度，判断微孢子虫种类，所述微孢子虫为中蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、熊蜂微孢子虫(Nosema bombi)和/或鳞翅目卷蛾科微孢子虫(Nosema thomsoni)。